ALPCO 游离甲状腺素(游离T4) ELISA试剂盒在内分泌疾病诊断中的应用

用于使用人血清通过酶免疫测定法直接定量测定游离甲状腺素。仅供研究使用。不用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品游离甲状腺素(游离T4) ELISA试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

游离甲状腺素(游离T4) ELISA试剂盒检测原理

ALPCO游离甲状腺素（游离T4）ELISA是一种竞争性免疫测定法。竞争发生在未标记抗原（存在于标准品、对照品和样品中）和酶标记抗原（结合物）之间，争夺微孔板上有限数量的抗体结合位点。洗涤和滗析程序可以去除未结合的物质。洗涤步骤后，加入酶底物。通过加入终止溶液终止酶促反应。吸光度在微孔板读数器上测量。形成的颜色强度与样品中游离甲状腺素（fT4）的浓度成反比。一组标准用于绘制标准曲线，从中可以直接读取样品和对照中的fT4量。该检测系统中使用的标记T4（结合物）对甲状腺素结合球蛋白（TBG）和人血清白蛋白（HSA）没有结合特性。微孔板上的结合位点被设计为具有低结合能力，以不干扰T4与其携带蛋白之间的平衡。该测定在pH、温度和离子强度的正常生理条件下进行。

测定程序

样品预处理：无。

所有试剂在使用前必须达到室温。校准品、对照品和样本应以双份进行测定。一旦开始程序，所有步骤都应连续完成，不得中断。

1. 准备fT4-HRP结合物的工作溶液和洗涤缓冲液。

2. 取出所需数量的孔条。重新密封袋子，并将任何未使用的孔条放回冰箱。

3. 向相应标记的孔中分别准确移液25 μL的每种校准品、对照品和样本（建议使用多通道移液管）。

4. 向每个孔中准确移液100 μL的结合物工作溶液（建议使用多通道移液管）。

5. 轻轻摇动板子10秒钟。

6. 在37°C下孵育板子1小时。

7. 用稀释后的洗涤缓冲液每个孔300 μL洗涤孔3次，并用吸水纸牢固拍打板子以确保其干燥（建议使用洗涤器）。

8. 在定时间隔向每个孔中准确移液150 μL的TMB底物。

9. 在37°C下孵育板子10-15分钟（或直到校准品A达到所需的深蓝色OD）。

10. 与步骤8相同的时间间隔向每个孔中准确移液50 μL的停止溶液。

11. 在加入停止溶液后20分钟内，在微孔板阅读器上于450 nm处读取板子的吸光度。*如果OD超出检测上限或450 nm滤光片不可用，可以替换为405 nm或415 nm滤光片。光密度会较低，但这不会影响样本结果。

计算

1. 计算每个校准品、对照品和样本双份的平均光密度。

2. 在半对数纸上绘制校准曲线，以平均光密度为Y轴，校准品浓度为X轴。如果使用免疫分析软件，建议使用4参数或5参数曲线。

3. 计算每个未知样本双份的平均光密度。

4. 直接从校准曲线上读取未知值。

典型校准器曲线

仅示例曲线。请勿用于计算结果。

文献参考：

1. Ingbar SH, et al. J Clin Invest. 1965; 44(10):1679–89.

2. Robbins J. Metabolism. 1973; 22(8):1021–6.

3. Schall RF Jr., et al. Clin Chem. 1978; 24(10):1801–4.

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。