AF 555偶联试剂盒数据分析&FAQ

FlyLink? 染料是一系列高度水溶性的荧光染料，跨越可见光和近红外光谱，用于标记生物分子，特别是蛋白质和核酸。FlyLink? 染料具有不同荧光染料的核心结构，覆盖了从UV到NIR的荧光光谱。对核心结构的创新修改使FlyLink? 染料优于其他商业染料，具有许多创新的新特性。我们的试剂盒已经预先激活，可以直接用于偶联。FlyLink? 标签套件是为准备FlyLink而设计的?直接来自蛋白质、肽和其他含有游离氨基的配体的缀合物

艾美捷AF 555偶联试剂盒：

Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580

Size: 100 μg*3

Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light

AF 555偶联试剂盒信息：

图1：FlyLink? 555是一种明亮且可光稳定的荧光染料，可由555 nmargonlaserline zui佳激发，它是TRITC、Cy3和Alexa Fluor 555的超级替代品。它产生生物学上更特异的偶联物和无背景

图2：FlyLink? 555光谱图

数据分析

1.共轭物浓度的计算：

C（mg/mL）=｛[A2so-（AmaxxCf）]÷1.4｝x稀释因子

式中：C，实验中收集的偶联物的浓度；稀释因子：光度测量中的稀释因子；

Azso和Ama：280 nm处的吸光度和zui大吸收波长处的吸光度（最大

FlyLink“”AF 488的吸收波长为490 nm）；Cf：修正系数。FlyLink“”AF 488的Cf值为0.1；

1.4：gG的消光系数（mL/mg）。FlyLink“”AF 488的消光系数为70000。

2.共轭物标记度（DOL）的计算：

DOL=（AmaxMwtx稀释系数）÷（exC）

式中：Ama：在zui大吸收波长（FlyLink“AF 488的zui大吸收波长为490 nm）下的吸光度；Dilution factor：光度测量中的稀释因子；C：实验中收集的偶联物的浓度；Mwt：待标记样品的分子量；?：荧光染料的消光系数，FlyLink的消光系数”“488 AF是70000。

注：柱洗脱的缀合物可能过于浓缩，无法直接进行吸光度检测，因此需要稀释至合适的浓度（在蛋白质分析仪检测的浓度范围内）。稀释倍数（即稀释因子）需要根据初始样品质量和洗脱缀合物的总体积进行估计。如果未稀释，则稀释系数为1。

FAQ：

Q1：浓缩后，样品浓度仍低于2 mg/mL？

A1：如果浓缩后样品浓度仍低于2 mg/mL，则可以适当调整标记系统的体积，但zui终浓度应大于1 mg/mL。FlyLink的音量?步骤1中的AF488标记溶液应为标记系统体积的10%。在步骤2中，去离子水可能不会结块，并且激活的FlyLink的体积? 488解决方案保持不变。你也可以根据自己的实验做出适当的调整。

Q2：如何选择合适的纯化柱，以适应不同分子量的待标记样品

A2：纯化的柱适用于分子量为100KD至200KD的样品。如果样品的分子量大于200kD或小于100kD，则zui好配备更合适的纯化柱尺寸。

Q3：待标记样品的分子量是否与FlyLink相似? AF 488？

A3：如果样品的分子量与FlyLink相似? AF 488，在完成与本说明书对应的标记步骤后，加入30?L 0.5?M NH4Cl，并在37°C下孵育10分钟，以猝灭freeFlyLink?AF 488，而不需要纯化步骤。

Biogradetech全球生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商：Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。