ADI牛白蛋白（BSA）ELISA试剂盒结果计算方案

牛白蛋白ELISA试剂盒是一种用于定量牛血清白蛋白的夹心免疫测定试剂盒蛋白质或抗体样品、重组蛋白、细胞提取物中的血清白蛋白（BSA），培养细胞、培养基或任何其他暴露于牛的生物样本血清或胎牛血清，并且可能含有痕量的BSA（宿主细胞蛋白或HCP）。到期由于试剂盒的高灵敏度和血清中白蛋白的高浓度，该试剂盒可能不会适用于测量血清中的白蛋白，或在BSA可能普遍存在的情况下，如测试环境中的污染物。建议使用ADI ELISA试剂盒#8000作为用于测量血清或其他含有高BSA的样本中BSA的替代方法浓度。此套件仅供研究使用。

牛白蛋白（BSA）ELISA试剂盒检测原理：

牛白蛋白ELISA试剂盒基于样品中牛白蛋白与两种抗体的结合抗体，一种固定在微量滴定孔上，另一种与辣根结合过氧化物酶（HRP）。洗涤步骤后，加入显色底物并着色由HRP在TMB底物上的酶反应产生，直接与样品中存在的BSA的量成比例。停止解决方案已添加到终止反应，然后使用ELISA微量滴定仪测量450nm处的吸光度好读者。样品中BSA的浓度根据以下标准曲线计算指定浓度的纯化牛白蛋白。

艾美捷牛白蛋白（BSA）ELISA试剂盒：

货号：ADI-8100

特异性：本试剂盒中使用的抗体已通过免疫电泳和ELISA证明能特异性地与牛血清白蛋白（BSA）反应，并且与其他牛血清蛋白几乎没有反应性。

在1%血清浓度下检测以下物种的血清，显示出的活性低于5 ng/ml：人、猴、羊、山羊、兔子、仓鼠、小鼠。

标准品的值分配：试剂盒中的标准品浓度已校准至Sigma Chemical的BSA标准品，货号#P0914，以及Thermo Scientific的次级参考品，货号#23209，这是对NIST BSA #927e的次级参考。

灵敏度：基于3次运行中13个重复样本的检测，0.5ng/ml样本的3倍标准差（SD）范围与阴性样本稀释液的3倍SD范围不重叠。

因此，牛血清白蛋白ELISA的灵敏度可以被认为是250-500 pg/ml。

正常范围：对来自四个不同来源的胎牛血清进行检测，显示白蛋白浓度范围为6.9至15.2 mg/ml。

精确度：含有低浓度和中等浓度BSA的样本在多个检测中作为重复样本进行检测（n=5），以获得检测间的可重复性。

使用点对点曲线拟合程序计算浓度的变异系数（CVs）。

BSA浓度的测量显示出良好的检测间可重复性（5.7至9.7% CV）。

结果计算：

可以使用任何免疫分析软件包来计算结果。推荐使用四参数曲线拟合。如果软件不可用，可以按照以下方法确定牛血清白蛋白（Bovine Albumin）浓度：

1. 计算重复样本的平均OD值。

2. 在坐标纸上，将标准品的平均OD值（y轴）与牛血清白蛋白的浓度（ng/ml）（x轴）作图。通过这些点绘制最佳拟合曲线以构建标准曲线。点对点的构建是最常见和可靠的方法。

3. 可以通过标准曲线的插值来确定未知样本和对照中的牛血清白蛋白浓度。

4. 将样本获得的值乘以每个样本的稀释因子。

5. 对于产生信号高于80 ng/ml标准品的样本，应进一步稀释并重新检测。

所需材料及未提供的材料：

? 能够提供100μl和1-10ml的移液器和移液管。推荐使用多通道移液器。

? 用于稀释样本和抗BSA-HRP浓缩液的一次性玻璃或塑料5-15ml试管。

? 用于稀释洗涤液浓缩液和样本稀释液浓缩液的量筒；200ml至1L，存放瓶。容器绝不能用于测量含有BSA的试剂。

? 用于稀释试剂浓缩液的蒸馏水或去离子水。

注意事项和安全指南：

标准品、对照品、样本稀释液和HRP抗体含有溴硝基二氧六环（BND：0.05%，重量/体积）。终止液含有1%硫酸。请遵循良好的实验室操作规范，避免任何试剂与皮肤、眼睛或黏膜接触。所有试剂都可以用大量水冲入下水道。

如果MSDS（材料安全数据表）尚未存档，可以向ADI网站索取或获得TMB、硫酸和BND的MSDS。

样本收集和处理：

培养基、细胞提取物、重组蛋白或其他生物流体在适当稀释以避免溶液基质干扰的情况下可以用作样本。尚未研究螯合剂（尿素、盐酸胍等）、洗涤剂（NP40、SDS等）、高盐浓度或低或高pH值的影响。含有这些试剂的样本应稀释在工作样本稀释液中以避免检测干扰。高浓度BSA标准品可以与稀释后的样本混合，以评估适当的BSA回收率。