ADI猴IgM ELISA试剂盒标本的采集和处理方案

ADI猴IgM ELISA试剂盒标本的采集和处理：

通过静脉穿刺采集血液，使其凝固，并在室温下离心分离血清温度。不要加热使血清失活。如果血清没有立即检测，请储存冷藏长达2周或冷冻长期储存。避免冻融循环。血浆的使用尚未进行调查，但应该是一个合适的检测样本。

艾美捷猴IgM ELISA试剂盒：

货号：ADI-7060

特异性：本试剂盒中使用的抗体已通过免疫电泳和ELISA证明能特异性地与IgM反应，并且与IgG、IgA、IgE或其他任何猴血清蛋白几乎没有反应性。

以下物种的血清在1:400稀释下没有显示出显著的反应性：

小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、牛、猪、马、羊、山羊、狗、猫、兔子或鸡；还有10%的新生牛血清。人血清显示出广泛的交叉反应性。

正常范围：对14只个体恒河猴、食蟹猴和狒狒的储存血清中的IgM进行检测，其范围从0.2到3.8 mg/ml（中位数=1.85 mg/ml）。每个实验室应确定其自身测试群体的预期值。

精确度：含有低、中、高浓度IgM的样本，代表3个不同物种，在同一个检测中多次检测（n=10）以提供检测内的精确度，并作为多个检测中的重复样本（n=5）以获得检测间的可重复性。使用点对点曲线拟合程序计算浓度的变异系数。

IgM浓度的测量显示出良好的检测内（5.3至7.8% CV）和检测间（4.2至16.2% CV）的可重复性。

检测程序：

将所有试剂平衡至实验室温度（18-30摄氏度）至少30分钟。

稀释血清样本至工作样本稀释液中。对于大多数正常的猴血清，大约4000倍的稀释是合适的。为了准确性，推荐进行两个稀释步骤，如下：

1) 10μl血清 + 990μl稀释液 = [1:100]，

2) 25μl [1:100] + 975μl稀释液 = [1:4000]。

不要稀释标准品或阳性对照血清。

结果计算：

1. 结果可以使用任何免疫分析软件包来计算。推荐使用四参数曲线拟合。如果没有软件可用，可以按照以下方法确定IgM浓度：

2. 计算重复样本的平均OD值。

3. 在坐标纸上，将标准品的平均OD值（y轴）与IgM的浓度（ng/ml）（x轴）作图。通过这些点绘制最佳拟合曲线以构建标准曲线。点对点的构建是最常见和可靠的方法。

4. 可以通过标准曲线的插值来确定未知样本和对照中的IgM浓度。

5. 将样本获得的值乘以每个样本的稀释因子。

6. 对于产生高于1000 ng/ml标准信号的样本，应进一步稀释并重新检测。

注意事项和安全指南：

猴血清可能含有人畜共患的、跨物种的传染性物质。在处理含有血清的样本（包括标准品和对照品）时，始终要戴手套，并把这些样本和容器作为生物危害废物进行处理。

校准液、样品稀释液和HRP标记抗体含有溴硝基二氧六环（BND：0.05%，重量/体积）。

终止液含有稀释的硫酸。请遵循良好的实验室操作规范，避免任何试剂与皮肤、眼睛或黏膜接触。所有试剂都可以用大量水冲入下水道。TMB、硫酸和BND的MSDS（材料安全数据表）可以从ADI网站索取或获得：样品稀释液和抗蛋白G-HRP含有Proclin 300（0.05%，体积/体积）。

质量控制：

准确和可重复的检测结果依赖于试剂和样本的正确储存、处理以及温度控制。按照指示储存所有试剂，并仅将用于检测的试剂回暖至室温。关键试剂和样本的保质期会因长时间暴露在非冷藏条件下而缩短，导致检测结果不准确。

所有溶液应清澈。浑浊或有颗粒物是试剂污染或不稳定的迹象，可能会干扰检测的正确进行。如出现这种情况，请勿使用。

样本对照品 试剂盒中提供了一个阳性血清对照品，并附有IgM浓度值范围。在此范围内的回收率是检测性能良好的指标。

每个实验室还应检测内部对照样本，这些样本代表实验室预期的样本群体，并且是稳定的。也应该运行一个样品稀释液阴性对照。

标准曲线 标准品产生的信号应该从最低标准品到最高标准品连续增加OD值，且差异大于1.2 OD。

非连续增加或低信号可能表明技术、协议指导和/或试剂准备、使用或稳定性存在问题。阴性稀释液对照的信号应低于最低标准品。不要依赖于存在这些问题的检测结果。

技术 准确和可重复的检测结果依赖于良好的实验室技术，包括移液、板洗涤和样本及试剂的处理。