Alpha Diagnostic International/艾美捷小鼠ANA（抗核抗体）总Ig ELISA试剂盒检测原理及结果计算

Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗体）总Ig ELISA试剂盒是一种适用于定量或滴定总抗体的免疫测定可提取核抗原特异性活性（IgG、IgA和IgM）（ENA）在血清或血浆中。其他生物液体，包括组织培养基）可以被验证使用。

艾美捷Alpha Diagnostic International 小鼠ANA（抗核抗体）总Ig ELISA试剂盒（ADI-5210）：

微孔板和所有其他试剂（如果未开封）在2-8°C下可稳定保存，直到盒子标签上印刷的到期日期为止。工作溶液的稳定性在试剂准备部分有所说明。

Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗体）总Ig ELISA试剂盒特异性：

用于涂覆微孔板的ENA是一种混合了多种可提取抗原的混合物（包括DNA、SSA/Ro、SSB/La、Scl70、Sm、RNP和Jo-1）；小鼠ANA检测可能会检测到针对这些抗原的抗体。ADI提供单独的ELISA试剂盒，用于检测特定于这些各个自身抗原的抗体。抗小鼠IgG+IgA+IgM（H+L）HRP结合物与结合在板上的小鼠IgG、IgA和IgM类抗体反应。IgE抗体的测定不会高于背景信号。

检测灵敏度：

ENA涂覆水平、HRP结合物浓度和低非特异性结合样本稀释液经过优化，以区分小鼠血清样本中抗核抗体（ANA）与背景（非抗体）信号，稀释比例为1:100。

Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗体）总Ig ELISA试剂盒检测原理：

小鼠ANA总Ig ELISA试剂盒是基于样本中小鼠ANA IgG、IgA和IgM与固定在微孔板上的ENA结合的原理，采用抗小鼠IgG+IgA+IgM（H+L）特异性抗体与HRP（辣根过氧化物酶）酶结合来检测总ANA抗体。在洗涤步骤后，加入显色底物（TMB），通过HRP在底物上的酶促反应生成颜色，该颜色的深浅与样本中ANA Ig的含量成正比。加入终止溶液以终止反应，然后使用ELISA微孔读数仪测量450nm处的吸光度。样本中总小鼠抗体的活性是相对于小鼠ANA标准品进行计算的。

样本采集和处理：

培养基、血清和其他生物液体可以作为样本，需适当稀释以避免溶液基质干扰。对于血清样本，通过静脉穿刺采集血液，静置凝固后，室温离心分离血清。对于其他样本，包括细胞培养基，在稀释之前应通过离心和/或过滤来澄清样本。

抗体稳定性：

建议将血清初始稀释到工作样本稀释液（WSD）中，以稳定抗体活性。这将增强样本的可重复性，并在冷藏或冷冻条件下保持抗体活性多年。进一步稀释到低非特异性结合样本稀释液（LNSD），以提供最低的检测背景，稀释倍数至少应为初始稀释的10倍，并应在检测当天进行。

Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗体）总Ig ELISA试剂盒结果计算：

方法D. 样本稀释曲线的滴度

根据每个样本的稀释曲线计算出的抗体活性滴度被推荐为最准确的定量方法。最佳的精确度可以通过以下指南来获得：

使用检测中间范围的OD值指数（2.0 – 0.5 OD）；这为比较实验组和重复实验提供了最佳的灵敏度和重复性。通常使用任意的1.0 OD作为标准。

制备每个样本的连续稀释，以提供一系列信号，这些信号高于和低于所选的指数。通过准确的稀释，如果每个样本运行至少4个稀释液，则可能不需要重复。

5倍稀释方案有助于有效覆盖一个范围，生成高于和低于1.0 OD的OD值。为了获得更精确的比较数据，可以将稀释方案收紧为3倍或2倍。

可使用中间OD范围内的标准值（例如，200 U/ml）来标准化各检测间的数值。

计算步骤：

在样本稀释的逆对数坐标系上，将每个阳性样本的两个稀释液的OD值绘制在x轴上，选择的标准值（任意或选定的标准物质）上方和下方的OD值。

从连接这两个样本OD值的点对点直线中，读取与所选指数的OD相对应的稀释值（x轴）。

= 总Ig抗体活性单位

示例：

使用1.0 OD指数测定4种抗体的滴度。

Alpha Diagnostic International（ADI）致力于开发、制造和供应新型诊断和质量控制试剂及检测试剂盒，用于人类和动物的基础生物学和疾病研究。艾美捷科技是Alpha Diagnostic International 的特约合作代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。