小鼠抗核抗原（ANA/ENA）IG（总（A+G+M））ELISA试剂盒的检测设计和设置方案

小鼠ANA（抗核抗体）总Ig ELISA试剂盒是一种适用于定量或滴定总抗体的免疫测定可提取核抗原特异性活性（IgG、IgA和IgM）（ENA）在血清或血浆中。其他生物液体，包括组织培养基）可以被验证使用。

小鼠抗核抗原（ANA/ENA）IG（总（A+G+M））ELISA试剂盒检测原理：

鼠抗核抗体（ANA）总Ig ELISA试剂盒基于样品中小鼠ANA IgG、IgA和IgM与固定在微孔板上的可提取核抗原（ENA）的结合，总ANA抗体通过与辣根过氧化物酶（HRP）酶偶联的特异性抗小鼠IgG+IgA+IgM（H+L）抗体来检测。经过洗涤步骤后，加入显色底物（TMB），并通过HRP在底物上的酶促反应产生颜色，该颜色与样品中存在的ANA Ig的量成正比。加入终止液以终止反应，然后使用ELISA微孔板读数器测量450nm处的吸光度。样品中总小鼠抗体的活性是相对于小鼠ANA校准物计算的。

艾美捷小鼠抗核抗原（ANA/ENA）IG（总（A+G+M））ELISA试剂盒：

货号：ADI-5210

特异性：用于涂层微孔板的ENA是各种可提取抗原（DNA、SSA/Ro、SSB/La、Scl70、Sm、RNP和Jo-1）的混合物；小鼠ANA检测可能检测到针对这些抗原的抗体。

ADI提供单独的ELISA试剂盒，用于检测针对这些个别自身抗原的特异性抗体。抗小鼠IgG+IgA+IgM (H+L) HRP偶联物与结合到板上ENA的小鼠IgG、IgA和IgM类抗体反应。IgE抗体不会在背景信号之上被测量。

检测灵敏度：ENA涂层水平、HRP偶联物浓度和低非特异性结合样本稀释液被优化，以区分小鼠血清样本稀释1:100后ANA Ig与背景（非抗体）信号。

试剂盒内容：如果未开封，微孔板和其他所有试剂在2-8摄氏度下稳定，直至盒标签上打印的有效期。工作溶液的稳定性在试剂准备部分指明。

检测设计和设置：

低非特异性结合（NSB）样本稀释液TBTm比1xSD20T稀释液更能降低NSB，而不会减少真正的阳性抗体信号，从而提供了更大的阳性和非免疫样本之间的鉴别能力。

样本收集和处理：

培养基、血清和其他生物液体在适当稀释以避免溶液基质干扰的情况下可以使用作为样本。对于血清，通过静脉采血，允许凝血，并通过室温离心分离血清。对于其他样本，包括组织培养基，在用样本稀释液稀释之前，通过离心和/或过滤澄清样本。

抗体稳定性：

建议将血清初步稀释到工作样本稀释液（WSD）中以稳定抗体活性。这增强了可重复的采样，并在冷藏或冷冻储存时，稳定抗体活性数年。进一步稀释到提供最低检测背景的低NSB样本稀释液（LNSD）中，应该是初始稀释的至少10倍，并且应该在检测当天进行。

示例：初始（1/5）：10μl血清 + 40μl WSD [或0.1ml + 0.4ml]

进一步（1/50）：10μl初始（1/5）+ 90μl LNSD（1/50）

检测设计：

在进行之前，回顾结果计算（第5-7页）和检测的限制（上文）：

1、选择适当的样本稀释。考虑阳性的预期效力，最小化非特异性结合（NSB）和其他基质效应；例如，非免疫样本应给出净信号<0.5 OD。这通常是小鼠血清的1/100或更高稀释，对于正常IgG和IgM水平。在工作样本稀释液（1xSD20T）或低NSB样本稀释液（TBTm）中稀释样本（见上文）。注意：所有样本必须在同一稀释液中稀释以进行适当比较——要么使用TBTm，要么使用1xSD20T。

2、运行样本稀释液空白。这个信号是检测性能的指标，特别是洗涤效果，并且用于净OD计算，如果需要的话。空白OD应<0.3。见方法A和B。

3、运行一组校准物。校准物验证检测是否按照规格执行，并且可以用来标准化检测间变异以增强精度。从校准物曲线上读取值，方法C，有限制。见上文检测限制。

4、为预期的高阳性运行一系列样本稀释，允许计算抗体滴度（当特定滴度至少比非免疫高4倍以上时）。见方法D。

5、如果用于定量，样本应双重运行；非免疫样本如果明显低于免疫样本，可以单次运行。用于定量的校准物，例如，用于检测间标准化，应双重运行。当从稀释曲线确定滴度时，如果用于滴度计算的稀释点超过两个，可以单次运行。