SpongeCol，胶原蛋白海绵，柱状孔结构的制备和使用

SpongeCol?是一种具有交织的柱状多孔结构的胶原海绵。SpongeCol?包含一种独特的柱状多孔网络，使细胞和营养物质能够完全流过交织的孔隙，为细胞的附着、生长和迁移提供了增加的表面积。SpongeCol?由高度纯化的I型胶原组成，最能够支持细胞的附着、增殖和功能。这种胶原海绵经轻度交联，具有增加的机械强度和耐久性，适用于短期和长期组织培养，但在较长时间内仍然可生物降解。孔的直径范围从100到400微米，平均直径约为200微米。胶原圆盘直径约为4毫米，厚度为1.5毫米。海绵圆盘适合放入96孔培养板或卫生卢尔连接器进行流动灌注。每包含二十五个胶原海绵圆盘。该产品经过终端灭菌处理，可立即使用。

艾美捷SpongeCol，胶原蛋白海绵，柱状孔结构，直径 4 毫米圆盘（ABM-5135-25EA）特性描述：

孔径尺寸：约为200微米孔径，范围在100至400微米之间。

尺寸：SpongeCol?为圆盘形状，直径约为4毫米，厚度为1.5毫米。

pH值：在PBS或组织培养培养基中悬浮时，约为7.0至7.4。

内毒素：用于生产该产品的胶原的内毒素水平为<1.0 EU/ml。

无菌性：SpongeCol?经过辐照处理并通过了无菌性测试。

存储/稳定性：室温存放 - 不建议加热超过40?C。存放在阴凉干燥的地方。该产品的稳定性正在评估中。

本产品仅用于研发目的，不适用于人类或其他用途。请参阅材料安全数据表以获取有关危害和安全操作规程的信息。

SpongeCol，胶原蛋白海绵，柱状孔结构，直径 4 毫米圆盘的制备和使用：

A. 制备和接种：

注意：细胞附着到海绵上通常是组织培养中最关键的一步。温度、pH值、气体交换和细胞浓度会影响附着的速率和效率。最佳接种速率取决于被培养的细胞类型。

1. 在无菌层流工作台中从包装中无菌取出海绵圆盘。

2. 使用无菌器械小心地将海绵放入96孔组织培养板的孔中。在转移海绵时小心不要损坏海绵。建议使用未经处理的组织培养塑料器皿。

注意：涂有组织的塑料器皿可能需要用琼脂糖涂层，以防止细胞附着在塑料而不是海绵上。

3. 将细胞悬浮在所需浓度（1x104 –1x105 cells/mL）并将足够体积的细胞溶液分配到放置在孔中的海绵顶部。

注意：另一种方法是将细胞悬浮在中和的胶原溶液中（如PureCol? I型胶原目录号5005-100ML或PureCol? EZ凝胶目录号5074-35ML）。将胶原/细胞溶液分配到放置在孔中的海绵顶部。

4. 转移到37?C孵育箱中约1 - 2小时，以便细胞初始附着。

注意：如果使用胶原悬浮法，胶原将在37?C聚合并将您的细胞封装在胶原基质和海绵中。

5. 经过1 - 2小时后，从孵育箱中取出板，并检查细胞附着情况。可能需要进行额外的测试以优化细胞附着到海绵上所需的时间。检查细胞的形态。细胞的附着和扩展将决定附着所需的时间。

6. 一旦细胞充分附着到海绵上，增加每个孔中的最终体积，以完全覆盖并为培养系统提供足够的培养基。

B. 更换培养基：

1. 在初始接种后的12至24小时更换培养基。更换频率将由细胞类型、细胞附着效率、pH值（保持在pH 7.0至7.4）、培养中可用的培养基营养物质决定。与2D培养系统相比，可能需要更频繁地更换培养基。

C. 细胞收获：

注意：蛋白酶消化是从海绵释放细胞的标准方法。细胞与胶原海绵的附着强度将因细胞系而异。酶浓度和消化时间将取决于酶的活性和细胞的浓度。胶原酶和/或胰蛋白酶可能是首选方法。

1. 使用EDTA-PBS洗涤海绵可能有助于蛋白酶消化。添加足够的体积以覆盖海绵。

2. 从孔中抽吸EDTA-PBS溶液。

3. 向孔中加入足够的解离溶液，完全覆盖海绵。

4. 转移到37?C孵育箱中。定期检查细胞的脱离情况。

5. 一旦细胞完全脱离，将细胞取出并分配到离心管中。

6. 根据需要离心细胞。