mFluor Violet 450小麦胚芽凝集素(WGA)探针实验方案说明

AAT Bioquest 的小麦胚芽凝集素（WGA）能与N-乙酰葡萄糖胺和唾液酸结合，是目前研究较多且有用的凝集素之一。小麦胚芽凝集素可用于标记细胞膜（如：活细胞、固定细胞、组织切片、酵母、革兰氏阳性细菌及真菌等 ），从而进行荧光成像和分析。也可用于免疫荧光（IF）、免疫组织化学（IHC）和流式细胞术（FC）。

艾美捷mFluor Violet 450小麦胚芽凝集素(WGA)探针：

货号：AAT-25500

Ex(nm) 406

Em(nm) 445

溶    剂 Water

存储条件 在-15℃以下保存，避光防潮

优势：

1.应用广泛；

2.不受膜电位控制；

3.用于细胞膜表面的标记，有助于膜结构的成像

图：将HeLa 细胞用浓度为 10 ?g/mL 的 mFluor? Violet 450小麦胚芽凝集素 (WGA) 探针染色 30 分钟。使用配备紫罗兰滤光片组的荧光显微镜获取的图像。

mFluor Violet 450小麦胚芽凝集素(WGA)探针实验方案：

样品分析方案

溶液配制

储备溶液配制：

mFluor 450 小麦胚芽凝集素 (WGA) 缀合物储备液 (200X)

将 500 ?L ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的储备溶液。

注意：重新配制的缀合物溶液可在 2-8 °C 下短期储存，或在 -20 °C 下长期储存。

工作溶液配制：

mFluor 450 小麦胚芽凝集素 (WGA) 缀合物工作溶液 (1X)

将 5 μL 200X WGA 储备溶液添加到 1 mL HHBS 缓冲液中。

注意：不同细胞系的优化染色浓度可能不同。 活细胞的推荐起始浓度为 5-10 ?g/mL。

操作方案

活细胞染色：

1. 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

2. 添加 100 ?L mFluor 450-WGA 工作溶液。

3. 将细胞与 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分钟。

4. 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

5. 使用 Ex/Em = 406/445 nm在荧光显微镜上成像细胞。

固定细胞染色：

1. 用含4%甲醛的PBS溶液固定细胞。

注意：对于固定细胞膜染色，建议在没有透化步骤的情况下进行染色。固定后透化步骤会导致细胞内区室染色，如高尔基体和内质网 (ER) 结构染色。

2. 添加 100 ?L mFluor 450-WGA 工作溶液。

3. 在室温下，用 WGA 工作溶液孵育细胞 10-30 分钟。

4. 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

5. 使用Ex/Em = 406/445 nm在荧光显微镜上成像细胞。