钙离子荧光探针Fluo-3,AM,超级纯，细胞内钙离子动态精准监测

钙测量对于许多生物学研究至关重要。结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够通过使用荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱和荧光微孔板读数器来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Fluo-3和Rhod-2是可见光兴奋性钙指示剂中最常用的。Fluo-3指示剂广泛应用于流式细胞术和共聚焦激光扫描显微镜。最近，Fluo-3，AM已被广泛用于基于细胞的高通量筛选试验，用于功能性GPCR试验。Fluo-3基本上是不荧光的，除非与Ca2+结合，并且在饱和Ca2+时的量子产率为~0.14，Ca2+的Kd为390 nM。

艾美捷钙离子荧光探针Fluo-3,AM,超级纯：

货号：AAT-21011

单位尺寸：1毫克

解离常数（Kd，纳摩尔）：390

分子量：1129.85

溶剂：DMSO

消光系数（厘米^-1 摩尔^-1）：86,0001

激发（纳米）：506

发射（纳米）：515

量子产率：0.151

仅限研究使用（RUO）

储存：冷冻（< -15°C）；尽量减少光照

CAS：121714-22-5

激发：FITC

发射：FITC

推荐板：黑色壁，透明底部

激发：490

发射：525

截止：515

推荐板：黑色壁，透明底部

仪器规格：底部读取模式，可编程液体处理

制备母液：除非另有说明，所有未使用的母液应在制备后分装成单次使用的小份，并储存在-20°C。避免反复冻融。

Fluo-3 AM 超纯级别母液：在高质量的无水DMSO中制备Fluo-3 AM的2至5 mM母液。

制备工作溶液：

Fluo-3 AM 超纯级别工作溶液

在实验当天，将Fluo-3 AM溶解在DMSO中，或将指示剂母液的小份解冻至室温。

在您选择的缓冲液中（例如，Hanks和Hepes缓冲液）用0.04%的Pluronic? F-127制备2至20 ?M的Fluo-3 AM工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用最终浓度为4-5 μM的Fluo-3 AM。细胞加载所需的指示剂的确切浓度必须通过实验确定。

注意：非离子洗涤剂Pluronic? F-127有时被用来增加Fluo-3 AM的水溶性。可以从AAT Bioquest购买各种Pluronic? F-127溶液。

注意：如果您的细胞包含有机阴离子转运体，可以在染料工作溶液中加入丙磺舒（1-2 mM）（最终浓度为0.5-1 mM），以减少脱酯化指示剂的泄漏。可以从AAT Bioquest购买各种ReadiUse?丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液。

样品实验协议：

以下是AAT推荐的将AM酯加载到活细胞中的协议。此协议仅提供指导，并应根据您的具体需求进行修改。

在生长介质中准备细胞过夜。

第二天，将1X Fluo-3 AM工作溶液添加到您的细胞板中。

注意：如果您的化合物与血清发生干扰，在染料加载前用新鲜的HHBS缓冲液替换生长介质。

将染料加载的板在37°C的细胞培养箱中孵育30至60分钟。

注意：将染料孵育超过2小时可以提高某些细胞系的信号强度。

将染料工作溶液替换为HHBS或您选择的缓冲液（如果适用，含有阴离子转运体抑制剂，如1 mM丙磺舒），以去除多余的探针。

根据需要添加刺激剂，并同时使用配备FITC滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统的荧光板读取器（如FDSS、FLIPR或FlexStation）在490/525 nm截止515 nm处测量荧光。

钙离子荧光探针Fluo-3,AM,超级纯文献参考：

A flow cytometric comparison of Indo-1 to fluo-3 and Fura Red excited with low power lasers for detecting Ca(2+) flux

Authors: Bailey S, Macardle PJ.

Journal: J Immunol Methods (2006): 220

Functional fluo-3/AM assay on P-glycoprotein transport activity in L1210/VCR cells by confocal microscopy

Authors: Orlicky J, Sulova Z, Dovinova I, Fiala R, Zahradnikova A, Jr., Breier A.

Journal: Gen Physiol Biophys (2004): 357

Comparison of human recombinant adenosine A2B receptor function assessed by Fluo-3-AM fluorometry and microphysiometry

Authors: Patel H, Porter RH, Palmer AM, Croucher MJ.

Journal: Br J Pharmacol (2003): 671

Measurement of the dissociation constant of Fluo-3 for Ca2+ in isolated rabbit cardiomyocytes using Ca2+ wave characteristics

Authors: Loughrey CM, MacEachern KE, Cooper J, Smith GL.

Journal: Cell Calcium (2003): 1

[Ca2+]i following extrasystoles in guinea-pig trabeculae microinjected with fluo-3 - a comparison with frog skeletal muscle fibres

Authors: Wohlfart B., undefined

Journal: Acta Physiol Scand (2000): 1