ReadiLink xtra快速iFluor 350抗体标记试剂盒(与BSA兼容)解决方案

ReadiLink?xtra快速抗体标记试剂盒基本上只需要2个简单的混合步骤，不需要柱纯化。ReadiLink?试剂盒中使用的预激活iFluor?350非常稳定，与抗体具有良好的反应性和选择性。该试剂盒具有标记约2x50 ug抗体的所有基本成分。试剂盒中提供的两瓶预活化iFluor?350染料中的每一瓶都针对标记约50?g抗体进行了优化。ReadiLink?xtra iFluor?350快速抗体标记试剂盒提供了一种方便而稳健的方法，可以用亮蓝色荧光iFluro?350荧光团标记单克隆和多克隆抗体。AAT Bioquest的iFluor?染料经过优化，可用于标记蛋白质，特别是抗体。这些染料明亮、耐光，对蛋白质的淬灭作用最小。它们可以被荧光仪器的主要激光线（例如350、405、488、555和633nm）很好地激发。

艾美捷ReadiLink xtra快速iFluor 350抗体标记试剂盒(与BSA兼容)：

货号：AAT-1950

单位尺寸：2次标记

修正因子（260纳米）：0.83

修正因子（280纳米）：0.23

消光系数（厘米^-1 摩尔^-1）：200001

激发（纳米）：345

发射（纳米）：450

量子产率：0.95

预期用途 仅限研究使用（RUO）

组分：

组分A：预活化的iFluor? 350 2瓶

组分B：反应缓冲液 1瓶（20微升）

组分C：TQ?-染色的猝灭缓冲液 1瓶（20微升）

样品实验协议：

运行偶联反应

将蛋白质工作溶液（溶液A）加入标记染料的一个瓶中（组分A），并通过反复吹打几次或短时间涡旋瓶来充分混合。

注意：如果标记100微克蛋白质，使用两瓶（组分A）标记染料，将100微克蛋白质分成2 x 50微克蛋白质，并分别与一瓶标记染料反应。然后在下一步中合并两个瓶。

将偶联反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注意：如果需要，偶联反应混合物可以旋转或摇晃更长时间。

停止偶联反应：

加入5微升（对于50微克蛋白质）或10微升（对于100微克蛋白质），即总反应体积的10%的TQ?-染色的猝灭缓冲液（组分C）到偶联反应混合物中；充分混合。

在室温下孵育10分钟。标记的蛋白质（抗体）现在可以使用。

蛋白质偶联物的储存：

蛋白质偶联物应在载体蛋白存在下（例如，0.1%牛血清白蛋白）以> 0.5毫克/毫升的浓度储存。对于更长时间的储存，蛋白质偶联物可以冻干或分成单次使用的小份，并储存在≤ -20°C。

工作溶液的准备：

蛋白质工作溶液（溶液A）

对于标记50微克蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1毫克/毫升），将5微升（总反应体积的10%）的反应缓冲液（组分B）与50微升的目标蛋白质溶液混合。

注意：如果您有不同的蛋白质浓度，请相应调整蛋白质体积，以使标记反应中有大约50微克的蛋白质可用。

注意：对于标记100微克蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1毫克/毫升），将10微升（总反应体积的10%）的反应缓冲液（组分B）与100微升的目标蛋白质溶液混合。

注意：蛋白质应溶解在1X磷酸盐缓冲液（PBS）中，pH 7.2 - 7.4；如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，必须对其进行透析，以对抗1X PBS，pH 7.2 - 7.4，或者使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（产品编号UFC501008来自Millipore）以去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。

注意：含有0.1至0.5%牛血清白蛋白（BSA）的不纯抗体或稳定化的抗体将被很好地标记。

注意：为了获得最佳的标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-2毫克/毫升，低于1毫克/毫升的浓度会显著降低偶联效率。

图：HeLa细胞微管蛋白的免疫荧光染色。HeLa细胞用4%PFA固定，用0.1%Triton X-100渗透并封闭。然后用兔抗微管蛋白单克隆抗体孵育细胞，并用ReadiLink?xtra Rapid iFluor?350抗体标记试剂盒（目录号1950）标记的山羊抗兔IgG染色。

Wheat Germ Agglutinin, AF488 Labeled小麦胚芽凝集素，AF488标记文献参考：

Identification of a Small Probe That Can Be Conjugated to Proteins by Proximity Labeling.

Authors: Sun, Weiping and Huo, Yinbo and Mei, Yuxuan and Zhou, Qingtong and Zhao, Suwen and Zhuang, Min

Journal: ACS chemical biology (2020): 39-43

Paper-based nuclease protection assay with on-chip sample pretreatment for point-of-need nucleic acid detection.

Authors: Noviana, Eka and Jain, Sidhartha and Hofstetter, Josephine and Geiss, Brian J and Dandy, David S and Henry, Charles S

Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2020): 3051-3061

Site-Specific Fluorescent Labeling of Antibodies and Diabodies Using SpyTag/SpyCatcher System for In Vivo Optical Imaging.

Authors: Alam, Md Kausar and El-Sayed, Ayman and Barreto, Kris and Bernhard, Wendy and Fonge, Humphrey and Geyer, C Ronald

Journal: Molecular imaging and biology (2019): 54-66

A neuraminidase potency assay for quantitative assessment of neuraminidase in influenza vaccines.

Authors: Byrne-Nash, Rose T and Gillis, Jacob H and Miller, David F and Bueter, Katie M and Kuck, Laura R and Rowlen, Kathy L

Journal: NPJ vaccines (2019): 3

Author Correction: A dynamic three-step mechanism drives the HIV-1 pre-fusion reaction.

Authors: Iliopoulou, Maro and Nolan, Rory and Alvarez, Luis and Watanabe, Yasunori and Coomer, Charles A and Jakobsdottir, G Maria and Bowden, Thomas A and Padilla-Parra, Sergi

Journal: Nature structural & molecular biology (2019): 526