兔抗Bub1抗体亲和纯化，助力有丝分裂功能研究

产品概述

兔抗Bub1抗体亲和纯化抗体是一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人源Bub1（苯并咪唑出芽抑制解除同源物1）的高浓度兔多克隆抗体（货号：A300-373A）。该抗体经抗原亲和纯化，以完整IgG形式提供，浓度为1000 ?g/ml（1 mg/ml），适用于免疫沉淀（IP）、免疫印迹（WB）和免疫组织化学（IHC）。作为纺锤体检查点核心激酶的特异性检测工具，该抗体适用于有丝分裂调控、染色体分离及肿瘤相关研究。

技术参数

参数 | 详细信息

靶点 | Bub1（苯并咪唑出芽抑制解除同源物1）

反应种属 | 人

应用 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原区域 | 第1–50位氨基酸之间（N端）

亚型 | IgG

标记 | 非偶联

纯化方式 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

浓度测定

采用比尔定律，以A280测定免疫球蛋白浓度（1 mg/ml IgG的A280为1.4）。本产品浓度为1000 ?g/ml（1 mg/ml），即每微升含1 ?g抗体。

储存与稳定性

储存条件：2–8°C，切勿冷冻。冷冻会导致抗体聚集和变性。

有效期：自收货之日起1年，在未受污染且按推荐条件储存的情况下。

缓冲液组分：Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液（pH 7–8），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

注意事项：叠氮化钠可能抑制过氧化物酶活性。在IP-WB检测中，如果使用HRP标记的二抗，由于后续洗涤步骤充分，影响可忽略；但若需对本抗体进行直接酶标记，请预先通过透析去除叠氮化钠。

应用与方法参数

推荐工作条件

应用 | 推荐稀释度/用量 | 特殊说明

免疫组织化学（IHC） | 1:500 – 1:2000 | FFPE切片推荐使用Tris-EDTA（pH 9.0）进行抗原修复

免疫沉淀（IP） | 6 ?g/mg 裂解液 | 每毫克细胞/组织裂解蛋白使用6 ?g抗体

免疫印迹（WB） | 1:1000 – 1:5000 | 过夜孵育，5%牛奶-TBST封闭

靶点生物学功能

Bub1在有丝分裂检查点中的核心作用

Bub1（budding uninhibited by benzimidazoles 1）是纺锤体检查点（也称有丝分裂检查点）的关键激酶。纺锤体检查点的功能是确保在所有复制的染色单体与双极纺锤体正确连接之前，细胞不进入后期（anaphase）——即不启动姐妹染色单体的分离。这一机制防止了非整倍体的产生，对维持基因组稳定性至关重要。

具体分子功能

1. 动粒靶向：Bub1负责将其他检查点蛋白——包括BubR1（Bub1相关蛋白）、Mad2和Polo样激酶（Plk1）——招募至动粒（kinetochore）上，形成功能性检查点信号复合物。

2. Cdc20磷酸化：Bub1直接磷酸化Cdc20（后期促进复合物的共激活因子），抑制APC/C对Pds1/securin的泛素化降解，从而阻止姐妹染色单体的过早分离。

3. 激酶活性：Bub1本身是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，其激酶活性对于检查点信号放大和维持等待信号至关重要。

临床意义

肿瘤中的异常：Bub1表达下调或功能缺失突变与染色体不稳定性（CIN）和多种人类癌症（如结直肠癌、乳腺癌、肝癌等）相关。

潜在治疗靶点：Bub1在一些增殖活跃的肿瘤中过表达，成为抗有丝分裂药物开发的潜在靶点。

别名

BUB1A

BUB1L

hBUB1

推定的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶

有丝分裂纺锤体检查点激酶

典型应用场景

1. 有丝分裂同步化实验：使用nocodazole或Taxol处理细胞阻滞于有丝分裂期，通过WB检测Bub1的表达和电泳迁移率（磷酸化修饰导致条带上移）。

2. 纺锤体检查点功能分析：在检查点激活（如微管解聚药物处理）或失活（如抑制激酶活性）条件下，通过IP检测Bub1对Cdc20的结合或磷酸化水平。

3. 免疫组化评估肿瘤增殖：在人肿瘤组织切片中进行IHC染色，Bub1阳性细胞核（尤其在动粒区域点状分布）可作为有丝分裂活性和染色体不稳定性的标志。

4. 蛋白相互作用研究：利用本抗体进行免疫共沉淀（co-IP），结合质谱鉴定与Bub1相互作用的新伙伴（如动粒蛋白、微管相关蛋白）。

5. 药物靶点验证：在Bub1激酶抑制剂处理后的细胞中，检测Bub1对下游底物（如Cdc20）的磷酸化水平变化。

实验注意事项

物种特异性：已验证人样本；小鼠、大鼠等物种可能存在交叉反应，需自行测试。

IHC抗原修复条件：务必使用Tris-EDTA pH 9.0，不可用柠檬酸盐缓冲液替代，否则可能导致无信号。

WB稀释梯度：初次实验建议从1:1000开始，若出现过强背景或非特异条带，可提高至1:2000–1:5000。

IP-WB的轻链干扰：由于Bub1分子量（~120 kDa）远大于抗体重链（~55 kDa），普通抗兔H+L二抗不会造成干扰；但仍推荐使用抗兔轻链特异性二抗以增加灵活性。

磷酸化形式检测：Bub1在有丝分裂期发生高度磷酸化，表现为WB条带向上迁移。建议配合磷酸酶处理对照确认信号来源于磷酸化修饰。

叠氮化钠影响：若进行细胞培养（如添加抗体至培养基）或体内注射实验，需通过透析或超滤去除叠氮化钠。

总结

A300-373A兔抗Bub1抗体凭借其1000 ?g/ml的高浓度、N端特异性表位设计以及IHC/IP/WB三平台验证，是研究有丝分裂检查点、动粒功能和基因组稳定性的可靠工具。优化的IHC抗原修复条件（Tris-EDTA pH 9.0）和WB高稀释度（1:1000–1:5000）适用于从细胞裂解液到组织切片的多种样本类型。结合IP实验中6 ?g/mg的明确用量，该抗体能够高效富集内源性Bub1及其复合物，为细胞周期和肿瘤生物学研究提供有力支持。

*本产品仅供研究使用，不用于诊断程序。