兔抗MCM3抗体亲和纯化，高信噪比优化，FFPE切片柠檬酸修复后信号增强

产品概述

兔抗MCM3抗体亲和纯化是一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人、小鼠源MCM3（微小染色体维持蛋白3）的高浓度兔多克隆抗体（货号：A300-192A）。该抗体经抗原亲和纯化，以完整IgG形式提供，浓度高达1000 ?g/ml，适用于免疫沉淀（IP）、免疫印迹（WB）和免疫组织化学（IHC）等多种应用。其高稀释比范围（WB达1:25,000）使其成为DNA复制与细胞周期研究中高性价比的检测工具。

技术参数

参数 | 详细信息

靶点 | MCM3（微小染色体维持复合物组分3）

反应种属 | 小鼠、人

应用 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原区域 | 第500–550位氨基酸之间

亚型 | IgG

标记 | 非偶联

纯化方式 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

储存与稳定性

储存条件：2–8°C，切勿冷冻。冷冻会导致抗体聚集和活性丧失。

有效期：自收货之日起1年，在未受污染且按推荐条件储存的情况下。

缓冲液组分：Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液（pH 7–8），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

注意事项：叠氮化钠可能抑制过氧化物酶活性。若计划将本抗体用于免疫沉淀后结合HRP标记的二抗检测，由于后续步骤会经过多次洗涤，影响可忽略；但若需直接标记本抗体，请预先通过透析去除叠氮化钠。

应用与方法参数

推荐工作条件

应用 | 推荐用量/稀释度 | 特殊说明

免疫组织化学（IHC） | 1:1000 – 1:5000 | FFPE切片需用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复

免疫沉淀（IP） | 6 ?g/mg 裂解液 | 可使用MCM2抗体（A300-191A）或MCM5抗体（A300-195A）沉淀MCM复合物

免疫印迹（WB） | 1:10,000 – 1:25,000 | 过夜孵育，5%牛奶-TBST封闭

免疫印迹（WB）详细方案

1. 封闭与抗体稀释液：5%脱脂牛奶-TBST（Tris缓冲盐溶液+0.1% Tween-20）

2. 一抗孵育：推荐4°C摇床过夜（约16小时）

3. 细胞裂解液WB检测：使用山羊抗兔IgG重轻链抗体（A120-101P）作为二抗

4. 免疫沉淀物WB检测：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景

注意：由于本抗体在WB中推荐稀释度极高（1:10,000起步），建议初次实验从1:10,000开始，根据信号强度向上调整至1:25,000或更高，以节约抗体并降低非特异条带。

免疫沉淀（IP）详细方案

用量：每毫克细胞裂解蛋白使用6 ?g抗体。

对照建议：使用同型对照兔IgG（非免疫血清）作为阴性对照。

复合物共沉淀：如需研究MCM全复合物（MCM2–7六聚体），可配合使用MCM2抗体（A300-191A）或MCM5抗体（A300-195A）进行IP，然后用本抗体检测MCM3的存在。本抗体也可单独用于IP MCM3及其相互作用蛋白。

二抗选择：IP后WB检测时，务必使用抗兔IgG轻链特异性二抗（如HRP标记的抗兔轻链抗体），以避免与IP抗体的重链（~55 kDa）产生交叉反应干扰MCM3（~110 kDa）的检测。

免疫组织化学（IHC）详细方案

样本类型：福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片、冰冻切片。

抗原修复：强烈推荐使用pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液，通过高压锅或微波炉进行热诱导抗原修复。不修复或使用EDTA缓冲液可能造成信号减弱。

稀释范围：1:1000–1:5000。建议从1:2000开始摸索。

检测系统：由于本抗体为非偶联形式，需配合生物素/HRP或荧光标记的抗兔二抗（如羊抗兔IgG）及相应的显色/荧光检测系统。

别名

宫颈癌原癌基因5（HCC5）

DNA聚合酶α全酶相关蛋白P1（P1.h）

DNA复制因子MCM3

p102

复制执照因子β亚基（RLF subunit beta, RLFB）

hRlf β亚基

典型应用场景

1. 细胞周期同步化实验：检测不同细胞周期阶段（G1/S/G2/M）MCM3的染色质结合量或总表达水平变化。

2. 复制执照状态分析：结合染色质分离技术，用WB检测染色质结合型MCM3，评估复制执照状态。

3. 肿瘤增殖标记物：在人肿瘤组织切片（乳腺癌、结直肠癌、肝癌等）中进行IHC染色，MCM3阳性细胞核比例可作为增殖指数。

4. 蛋白相互作用研究：利用本抗体进行免疫共沉淀（co-IP），结合质谱或WB鉴定与MCM3相互作用的蛋白（如MCM5、MCM3AP等）。

5. DNA复制抑制剂药效评价：药物处理后检测MCM3的表达或染色质装载变化，评估对复制起始的影响。

实验注意事项

物种交叉反应性：已验证人与小鼠；大鼠、猴等其他物种需自行测试。

IHC抗原修复至关重要：未修复或修复不当会导致信号极弱甚至无信号。

WB高稀释度建议：首次使用可尝试1:5000，若信号过强出现背景，可提高至1:15,000–1:25,000。

IP-WB的轻链问题：务必使用抗兔轻链特异性二抗，否则会检测到50 kDa左右的重链条带，干扰目标蛋白附近区域的判断。

叠氮化钠影响：若进行细胞培养或动物注射实验，需通过透析去除。

*本产品仅供研究使用，不用于诊断程序。