重组胰蛋白酶TrypLE ELISA试剂盒（干细胞专用）检测原理

重组胰蛋白酶TrypLE ELISA试剂盒（干细胞专用）是一种高灵敏度、通用性的试剂盒，用于定量检测重组类胰蛋白酶及其类似物。该试剂盒能够对中间体、半成品和成品生物制品中残留的重组胰蛋白酶（TrypLE）进行敏感、特异和准确的检测。该试剂盒具有扩展的检测范围，为0.1-16 ng/mL，并将优化的定量限制降低至0.1 ng/mL。

艾美捷重组胰蛋白酶TrypLE ELISA试剂盒（干细胞专用）基本参数：

目录号：A-QEK003

规格：100mL

储存：在黑暗中2-8°C（试剂盒标签上显示了生产日期和保质期。）

重组胰蛋白酶TrypLE ELISA试剂盒（干细胞专用）检测原理：

该试剂盒利用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术检测微量样品中TrypLE的量。将捕获抗体包被在96孔酶标记板上以产生固相抗体。随后，添加标准品和试样，然后添加辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体。这形成了固相抗体TrypLE检测抗体三明治复合体。反应后，进行洗涤，并加入显色基质进行着色发展在HRP的催化和停止解决方案（如下图所示）。在450nm和630nm处测量吸光度（OD值）630nm作为参考波长。OD值与样品中TrypLE含量呈正相关。

性能规范：

检测限制：小于0.1 ng/mL

定量限制：0.1 ng/mL

线性范围：0.1-16 ng/mL

准确度（回收率）：70% - 130%

准确度（测量偏差）：≤ 15%

重复性（批内变异）：≤ 10%

试剂制备：

1. 洗涤缓冲液（1×）：将洗涤缓冲液（20×）与去离子水按照1:20的比例稀释，例如，将10 mL洗涤缓冲液（20×）与190 mL去离子水混合。注意：如果洗涤缓冲液（20×）出现结晶，轻轻摇晃室温下或在37°C的水浴中，直到结晶完全溶解后再稀释。

2. 底物溶液的制备：将发展溶液A和发展溶液B体积相等地混合，充分搅拌，并存放在避光条件下。注意：不要提前太久准备底物溶液。通常，在使用前的10分钟内准备。如果混合后溶液变蓝色，不要使用。

3. 标准曲线的制备：（注意：每次实验都要准备新鲜的标准溶液）

将标准品（1 μg/mL）用样品稀释液稀释至浓度为16 ng/mL，然后按照下面的图表进行后续稀释：

样品制备：

将样品平衡至室温，并在加入测定之前将其充分混合。如果用户需要稀释试剂盒中提供的样品或高浓度标准品试剂盒可用于稀释。对于基于细胞的样品，建议以3000rpm离心5分钟，收集上清液，并进行测定。

程序分析：

所有操作应在室温下进行，并建议对所有样品孔进行重复测量。

1. 将试剂盒组分在室温下平衡30分钟。从已平衡至室温的铝箔袋中取出所需的试纸条。使用记号笔标记试纸条的顺序。用板封密封剩余的试纸条，然后放回铝箔袋中密封。将袋子密封并储存在2-8°C的环境中。注意：在洗板过程中，试纸条可能容易脱落，因此要注意正确标记。

2. 样品孵育：将稀释后的标准品和测试样品加入微孔板孔中（建议顺序：标准孔、空白孔、样品孔；以浓度梯度加入标准品）。每孔加入100 μL，用板封密封板，37°C下以500 rpm的速度摇动孵育1小时。注意：控制样品加入时间在10分钟内，以避免随时间漂移。在孵育过程中，不适当的封闭或不完全封闭可能导致反应溶液蒸发并产生实验误差。

3. 洗板：孵育后，小心取下板封并倒掉孔中的液体。用洗涤缓冲液（1×）洗板三次（每孔250 μL），轻轻敲干以去除样品孔中的残余液体。注意：如果使用手工洗涤，加入洗涤缓冲液（1×）后静置1分钟；如果使用洗板机，加入洗涤缓冲液后轻轻摇动5秒钟。

4. 酶标抗体孵育：向每个孔中加入酶标抗体，每孔100 μL。用板封密封板，37°C下以500 rpm的速度摇动孵育1小时。

注：每次清洗后加液前，检查条带是否固定，防止加液后固定条带时溅出液体

5.洗板：同步骤3。

6.显色：将预配置的基质溶液添加到微孔板孔中，100μL/孔。密封板

使用平板封口机，在37°C的光线保护环境中孵育15分钟。

7.停止反应：加入停止溶液，100μL/孔。读取均匀显色后的吸光度。注意：读数通常在添加停止溶液后20分钟内完成。

8.读取：将微孔板放入微孔板读取器中，将双波长设置为450/630nm，并读取吸光度值。

注意：建议在微孔板阅读器程序中设置5-10秒的摇动步骤。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

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