Biogradetech货号A-MGL77：干细胞专用，基质胶（体外/体内，干细胞分化）

基质胶作为一种重要的细胞外基质，具有广泛的应用价值。它可以用于各种研究领域，如细胞生物学、组织工程、肿瘤研究等。基质胶的特殊成分和结构为细胞提供了理想的生长环境，促进细胞的黏附、迁移和增殖。同时，基质胶还可以模拟人体组织的结构和功能，为研究人员提供了重要的工具。

基底膜基质胶的应用广泛，不仅可以促进细胞的生长和分化，还可以模拟真实的组织环境，为研究细胞行为和疾病机制提供重要工具。无论是进行管状结构形成实验、类器官形成实验还是肿瘤类器官形成实验，基底膜基质胶都能发挥重要作用。

突破干细胞培养的界限，开启无限可能！您是否在干细胞培养过程中遇到了困难？您是否希望找到一种可靠、高效的基质胶来支持您的研究？那么，我们向您推荐一款创新的产品——Biogradetech货号A-MGL77干细胞专用的基质胶！

如果您对干细胞培养研究感兴趣，那么Biogradetech干细胞专用的基底膜绝对是您的得力助手。它将为你的实验提供可靠的支持，帮助你揭开细胞行为和组织发育的奥秘。赶快尝试Biogradetech干细胞专用基底膜，开启细胞培养的新篇章吧！

作为Biogradetech在中国区域的独家代理，艾美捷科技将为中国客户提供全面的Biogradetech产品以及客户订制化服务。欢迎大家随时联系我们。

产品英文名称：For iPSC/Stem Cell, Basement Membrane Matrix

产品中文名称：干细胞专用，基质胶（体外/体内，干细胞分化）

货号：A-MGL77

规格：5mL、10mL

储存条件：≤-20°C

产品描述：

Biogradetech货号A-MGL77干细胞专用的基质胶是一种连续的特殊细胞外基质薄膜，形成了内皮细胞、上皮细胞、肌肉细胞或神经细胞与其相邻基质之间的界面。基质胶在发育和伤口愈合过程中会被降解和再生。它不仅支持细胞和细胞层，还对组织结构起着重要作用，影响细胞的粘附、迁移、增殖和分化。基质胶能够成为转移性肿瘤细胞侵袭的主要屏障。

Biogradetech货号A-MGL77干细胞专用的基质胶是从Engelbreth-Holm-Swarm（EHS）肿瘤中纯化得到的可溶性基质胶。此基质胶在37°C下形成重组基底膜基质胶。此基质胶的主要成分包括层粘连蛋白、IV型胶原、粘连素和肝素硫酸酯蛋白聚糖。

适用范围：

它是一种成熟的无饲养层的人类胚胎干细胞（hES）培养基质。它与特定培养基结合用来培养干细胞（如人类胚胎干细胞hESC、诱导多能干细胞iPSC）。经过筛选的干细胞基质胶提供了人类胚胎干细胞和诱导多能干细胞滋养层培养所需的可重复性和一致性，也可用于体内分化研究，如畸胎瘤形成。  

产品参数：

来源：小鼠肿瘤；

1.颜色：含酚红的基质胶呈黄粉色，无酚红的基质胶呈半透明淡黄色；

2.形态：标准型基质胶在4°C下溶解为透明液体；高浓度基质胶在0°C下溶解后为透明液体，长时间放置于4°C后会半凝胶化。

3.浓度：蛋白质浓度范围为8至26 mg/mL。

4.内毒素：≤ 4.5 EU/mL

5.凝胶时间：室温下5-30分钟凝胶，当温度从22°C升至37°C时，凝胶形成速度加快。

包被涂层方法：

打造成功的干细胞培养环境，关键在于选择合适的基质胶。其中，基质胶的包被涂层方法对于不同的应用需求有所不同。下面，我们将介绍基质胶的包被涂层步骤，帮助您轻松应对各种细胞培养挑战。

首先，让我们来了解一下基质胶的解冻过程。将Biogradetech货号A-MGL77干细胞专用的基质胶在2-8°C的冰箱中过夜解冻。由于冰箱温度可能有所不同，因此建议在解冻过程中将基质胶放在冰上保持低温，以防止过早凝胶化。解冻后的基质胶在15°C以上的温度下会迅速凝固，因此在使用时要保持冰上状态，以避免不必要的凝胶形成。

Biogradetech货号A-MGL77干细胞专用的基质胶有许多应用场景，需要不同的厚度和浓度。例如，用于内皮细胞形成类似毛细血管的结构（管状结构形成实验）、大鼠主动脉组织分化为类似毛细血管的结构（主动脉环形成实验）、上皮类器官形成或肿瘤类器官结构形成，需要较厚的凝胶，也就是厚层凝胶法。而一些应用，如原代细胞的传代培养，需要薄层涂层而不是厚凝胶，因此应采用薄层凝胶法。

厚层凝胶法：

1.按上述方法解冻基质胶；

2.缓慢上下移液将基质胶混匀，注意不要引入空气泡；

3.向细胞培养板表面加入200-300μL/cm²基质胶，平铺均匀，注意避免产生气泡；

4.将培养板放置在 37 ℃，等待 30 min 形成凝胶即可使用。

薄层包被法：

1.按上述方法解冻基质胶；

2.缓慢上下移液将基质胶混匀，注意不要引入空气泡；

3.根据实验需求使用预冷的培养基稀释。建议将基质胶稀释为1:100以用于原代细胞的扩增。对于您的应用，可能需要经验性地确定最佳涂层浓度；

4.加入适量体积的该溶液覆盖整个细胞培养板表面。建议加入300μL/cm²的溶液；

5.将培养板放置在室温，孵育至少1h；

6.吸去上清即可使用。不要让涂层表面干燥。

我们的干细胞专用基底膜是您研究和应用干细胞的理想选择。它为您提供了一个可靠的平台，支持干细胞的生长、分化和研究。无论是进行基础研究还是药物筛选，我们的产品都能满足您的需求。使用我们的基底膜，您可以更好地模拟体内环境，促进干细胞的正常生长和发育。它的成分经过精心筛选和纯化，确保了高质量和可重复性的结果。

我们致力于为您提供优质的产品和客户服务。我们的干细胞专用基底膜将成为您研究的有力助手，助您取得突破性的发现和成果。立即选择我们的产品，开启您的干细胞研究之旅！

实验操作示例：以诱导多能干细胞iPSC培养为例

1. 设备、试剂和耗材

1.1 试剂：基质胶（货号：A-MGL77），ROCK抑制剂 (Y-27632)，DMEM/F12，mTeSR1/E8培养基，Accutase解离剂，PBS (D-PBS)；

1.2 耗材：无菌移液器枪头、6孔板（或其它孔数的板，本方案将以6孔板为例)，无菌EP管。

2. 实验前准备

2.1. 材料预冷

2.1.1 将基质胶放入冰盒中，在4°C的冰箱中慢慢融化过夜（在操作过程中不要让产品温度超过4°C。始终保持产品在冰上，并使用冰冷的溶液或细胞悬液稀释。）

2.1.2 与基质胶接触的耗材或试剂，如无菌离心管、无菌移液枪头和DMEM/F12，需提前在4°C冷藏。

2.2. 稀释基质胶（货号：A-MGL77）以1:80 - 1:100的比例

（提示：1:80 - 1:100都是可以的，相当于基质胶浓度为0.1mg/mL。对于iPSC培养，我们建议以约0.013 mg/cm?的浓度包被，例如，将12.5 mg/mL的基质胶稀释1:100后，每个6孔板的包被体积为1 mL。）

2.2.1 将适量的4°C预冷的DMEM/F12转移至冷却的EP管中；

2.2.2 使用预冷的枪头将DMEM/F12转移到分装好的基质胶中，充分混合后转移到另一个EP管中（保持在冰上）。重复此步骤2-3次，直到基质胶完全移液至EP管中，然后稀释至满足自己设计要求的最终浓度；

2.2.3 此基质胶混合液作为后续铺板包被使用。

2.3. 包被涂层步骤

2.3.1 将1 mL/孔的基质胶混合液加入预冷的6孔板中，轻轻摇动板子以确保混合液均匀地覆盖在板上；

2.3.2 将6孔板转移到37°C的培养箱中过夜孵育（孵育1-2小时后即可使用板子，但过夜孵育更适合细胞培养。涂层的板子可在4°C保存，并在涂层后的一周内使用。使用板子前应将涂层液吸去）；

2.3.3 使用前吸去涂层上方的液体。

2.4. 制备ROCK抑制剂（Y-27632）工作液

使用无菌PBS溶解Y-27632，并配置成10mM的溶液（1000X），工作浓度为10uM。

2.5. 制备含ROCK抑制剂的培养基：

将10mM的ROCK抑制剂（Y-27632）加入mTeSR1/E8培养基中，使最终浓度为10uM。

注意：4°C的基质胶会逐渐聚合成胶。请严格控制操作温度和操作时间。

3. 细胞培养

3.1. iPSC复苏

3.1.1 从液氮或干冰中取出iPSC，并在37°C的水中迅速解冻；

3.1.2 用75%的酒精消毒冻存管，然后将其转移到工作台上；

3.1.3 将细胞溶液转移到新的15ml EP管中，并用DMEM/F12/DMEM冲洗冻存管两次；

3.1.4 在室温下，以300g的速度离心15ml EP管，离心5分钟（iPSC对200-300g的速度有很好的耐受性，推荐使用300g以最大化细胞捕获，标准程序中推荐使用200g）；

3.1.5 丢弃上清液，用2mL含有ROCK抑制剂的培养基轻轻重悬iPSC，然后将其转移到铺好的6孔板中。轻轻摇动板子以均匀分布细胞（每孔细胞密度调整为1×10⁶个细胞）；

3.1.6 将6孔板放回37°C的培养箱中（请在细胞转移后立即执行，以避免细胞中心密度增加）；

3.1.7 第二天移除ROCK抑制剂，并使用无抑制剂的培养基继续培养细胞。

注意：不推荐在细胞培养中使用抗生素，因为它们可能干扰细胞及其分化潜能。培养环境应与其他细胞隔离，并在两次传代后进行支原体检测。如果冷冻保存液中含有DMSO，DMSO 在室温下对细胞有毒，复苏步骤应快速完成。

3.2. iPSC传代

3.2.1 丢弃培养上清液，用1mL PBS冲洗，然后加入1mL Acuutase；

3.2.2 将培养板放入37°C的培养箱中3分钟，或者在显微镜下观察，直到大部分细胞脱落（如果细胞仍附着，可将培养板放在手上，用另一只手轻轻放在培养板上，使板轻微震动，使细胞脱落）；

3.2.3 在传代之前，准备基质胶涂层的6孔板；

3.2.4 倾斜培养板，将Acuutase溶液沿着培养层转移两次，以分离细胞团并将其转移到离心管中；

3.2.5 用DMEM/F12冲洗培养层表面，并与离心管中的细胞溶液混合（用DMEM/F12或PBS洗涤，至少建议使用5%的培养基进行后续颗粒化和附着）；

3.2.6 在室温下，以300g的速度离心5min；

3.2.7 丢弃上清液，用含有ROCK抑制剂的培养基悬浮细胞；

3.2.8 将细胞转移到涂层的6孔板中。轻轻摇动板子以均匀分布细胞；

3.2.9 将6孔板放回37°C的培养箱中进行孵育。

注意：当iPSC生长到单层时，它们会迅速分化和死亡。为了保持生长和多能性，需在其长满前进行传代。

3.3. iPSC冷冻保存

3.3.1 准备细胞解离液。

3.3.2 细胞分离方法类似于传代，可以使用细胞计数器与细胞冷冻保存配合使用；

3.3.3 每管以1×10⁶细胞的密度冷冻，随后离心、分出培养基，然后在适量的冷冻液中重新悬浮；

3.3.4 将1mL重新悬浮的细胞冷冻物加入1.5mL的冻存管中，进行程序冷却，然后长期存放在液氮中。

Biogradetech是生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商。他们提供广泛的产品组合，包括细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域的试剂。Biogradetech的产品受到全球生物研究机构和生物制药公司的高度追捧，他们以高质量、可靠性和服务而闻名。 

Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。其产品均在严格的全球标准下生产，Biogradetech还提供专业的技术支持，帮助客户选择正确的产品，并正确使用产品。Biogradetech致力于为客户提供高质量的产品和服务，是那些寻求高质量试剂和可靠结果的人值得信赖的合作伙伴。 为了更好地满足亚太地区客户的需求并提升交付速度，Biogradetech在香港设立现货中心，将能更迅速地满足客户的需求，确保订单的高效处理，并加速产品的交付和配送，从而提供更快速、可靠的服务。 

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