Biogradetech货号A-EXO008：血浆/血清外泌体总RNA提取试剂盒（磁珠法）

外泌体（Exosome，Extracellular vesicles，EVs）是一类由细胞释放到细胞外的小型膜包裹囊泡。它们起源于细胞内部的多种细胞器，如内质网、高尔基体和细胞膜，并通过融合或分泌途径释放到细胞外。外泌体的大小通常在30到150纳米之间，具有丰富的蛋白质、核酸和脂质组成。

外泌体在细胞间的通讯和信号传递中起着重要作用。它们可以通过包裹和保护其内部的生物活性分子，如小RNA、mRNA、蛋白质和代谢产物，将这些分子传递到目标细胞。这种传递方式可以影响目标细胞的基因表达、蛋白质合成和细胞功能。因此，外泌体被认为是一种重要的细胞间通讯介质，参与了多种生理和病理过程，包括免疫调节、细胞增殖和凋亡、肿瘤转移和神经系统功能。

外泌体RNA在细胞生物学中具有重要的生物学意义。以下是外泌体RNA的几个主要生物学意义：

细胞间通讯：外泌体RNA可以通过外泌体的释放和摄取，在细胞间进行信息传递和通讯。外泌体中的RNA分子，如微RNA（miRNA）、mRNA和长非编码RNA（lncRNA），可以被目标细胞摄取，并调节目标细胞的基因表达和功能。这种方式可以影响细胞的生理状态、细胞增殖和凋亡、细胞分化和细胞迁移等生物学过程。

疾病诊断和预后评估：外泌体RNA的组成和表达模式在不同疾病的发生和发展中发生变化，因此被广泛研究作为潜在的生物标志物用于疾病的诊断和预后评估。通过分析外泌体中的特定RNA分子的表达水平或突变情况，可以识别出与疾病相关的特征，并为疾病的早期检测、分类和治疗提供重要信息。

调控基因表达：外泌体RNA可以在目标细胞中调控基因表达。例如，miRNA是一类短RNA分子，可以通过与目标mRNA结合，抑制其翻译或降解。外泌体中的miRNA可以通过外泌体的摄取传递到目标细胞，并调控目标细胞中的基因表达模式。这种调控机制对于细胞的生理调节、疾病的发生和发展具有重要影响。

肿瘤转移和预后评估：外泌体RNA在肿瘤转移和预后评估中起着重要作用。肿瘤细胞释放的外泌体中含有特定的RNA分子，可以通过影响肿瘤微环境、调节肿瘤细胞的增殖和转移，以及与免疫系统的相互作用等方式，促进肿瘤的生长和转移。通过分析外泌体中的RNA分子，可以评估肿瘤的侵袭性和预后风险，为肿瘤治疗和预后评估提供重要依据。

总之，外泌体RNA在细胞间通讯、疾病诊断、基因表达调控以及肿瘤转移和预后评估等方面具有重要的生物学意义。它们在细胞生物学和疾病研究中起着关键的调节和调控作用，为我们深入理解细胞功能和疾病机制提供了有价值的信息。

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本试剂盒基于自主研发的磁颗粒，能特异性捕获外泌体而不吸附杂质，实现高纯度、高回收率外泌体总RNA提取。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于血浆、血清等复杂样本中的外泌体总RNA提取。提取的外泌体RNA可用于反转录、RT-PCR、RT-qPCR、RIP、NGS等研究。

试剂盒组分：

自备仪器、试剂与耗材：

高速冷冻离心机

侧摆摇床

1.5mL离心管

磁力架、冰盒

氯仿、异丙醇、75%乙醇等

使用方法：

1、样品预处理

1）去除细胞。4℃，300g，离心 5min，转移上清到新的离心管；

对无细胞的样品，可以跳过此步骤。

2）去除细胞及细胞碎片。4℃，2000g，离心 10min，转移上清到新的离心管；

3）去除大体积颗粒。步骤 2）得到的上清，4℃，14000g，离心 30min，转移上清到新的离心管。

2、富集外泌体

1）取经预处理后的样品500μL（如果不足500μL，可用Solution A补足）到1.5mL离心管，加入10mg（加入量±10%均可）ExoMag Exosome Beads，固定在侧摆摇床上，17rpm，室温旋转孵育30min；

2）置于磁力架，静置5s，弃上清；

3）加入1mL Solution A，上下颠倒混匀，置于磁力架，静置5s，弃上清；

4）重复上述步骤3）2次，保留磁颗粒；

3、外泌体RNA提取

1）向磁颗粒中，加入1mL Extraction Buffer（主要成分为Trizol，注意防护），冰上静置5min；

2）加入200μL氯仿，盖紧管盖，剧烈振荡15s，冰上静置5min；

3）4℃，12000g，离心15min；

离心后，溶液分为三层（从上往下，分别是水相层、中间层、有机相层），RNA存在于水相层中。

4）将水相层转移至1.5mL Nuclease-free Tubes中，加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀，冰上静置10min；

水相体积约为所加Extraction Buffer体积的60-70%，建议转移约600μL水相，以防吸到中间层造成DNA污染。

5）4℃，12000g，离心10min，吸弃上清，保留沉淀；

吸弃上清时，用移液器缓慢吸取，最后残留约50μL，避免吸走RNA沉淀。（在沉淀不明显时，尤为重要）

6）向沉淀中，加入1mL 75%乙醇，涡旋充分洗涤，并轻弹管底，重悬沉淀；

7）4℃，12000g，离心5min；吸弃上清，保留沉淀；

吸弃上清时，用移液器缓慢吸取，最后残留少量液体，避免吸走RNA沉淀。（在沉淀不明显时，尤为重要）

剩余的少量液体可短暂离心，然后用10μL移液器吸出，注意不要吸到沉淀。

8）室温放置晾干。注意，不要晾的过干，完全干燥会很难溶解，约3min即可；

9）向沉淀中，加入11μL DEPC-treated Water，反复吹打混匀，充分溶解后取少量检测，其余溶液置于-80℃保存备用。

注意事项：

1）Extraction Buffer中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会引起中毒、灼伤及其他身体伤害。使用时应穿戴防护物，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗；

2）RNA提取操作需要在冰上进行；

3）请穿实验服并佩戴一次性手套操作，避免RNase污染；

4）RNA提取所用到的耗材，都要预防RNase酶污染；所用到的溶液应使用RNase-free water配制；

5）需自备氯仿、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇（DEPC处理水配制）、RNase-free water；

6）RNA半衰期比较短，易降解建议抽提后尽快进行续实验；

7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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Biogradetech是全球生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商。他们提供广泛的产品组合，包括细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域的试剂。Biogradetech的产品受到全球生物研究机构和生物制药公司的高度追捧，他们以高质量、可靠性和服务而闻名。   

Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。其产品均在严格的全球标准下生产，Biogradetech还提供专业的技术支持，帮助客户选择正确的产品，并正确使用产品。Biogradetech致力于为客户提供高质量的产品和服务，是那些寻求高质量试剂和可靠结果的人值得信赖的合作伙伴。   

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