Biogradetech：HEK293外泌体促进分泌的全悬浮生长培养基

HEK293细胞是一种人类胚胎肾细胞系，常用于生物医学研究和生产重组蛋白的工具。外泌体是一种小型的细胞分泌囊泡，它们在生物学中具有重要的功能和意义。

外泌体可以通过释放内部的生物活性分子，如蛋白质、核酸、脂质和细胞因子等，与周围细胞进行信息传递和相互作用。它们在细胞间通讯、信号传导、免疫调节、疾病发展等方面发挥着重要的作用。

对于HEK293细胞而言，其外泌体具有多种生物学意义。首先，HEK293细胞可以产生大量的外泌体，使其成为研究外泌体生物学和功能的理想模型。研究人员可以通过分离和纯化HEK293细胞产生的外泌体，进一步探索其组成、功能和调控机制。

其次，HEK293细胞可以被转染或转基因改造，使其产生特定的外泌体，用于传递特定的生物活性分子。这为研究特定信号通路、疾病机制以及开发外泌体作为治疗载体或诊断工具提供了可能性。

此外，HEK293细胞外泌体的研究还可以揭示细胞间通讯的机制，探索外泌体在疾病发展中的作用，例如肿瘤转移、炎症反应和神经退行性疾病等。通过深入了解HEK293细胞外泌体的生物学意义，我们可以更好地理解细胞间相互作用的复杂性，并为疾病诊断和治疗的研究提供新的思路和方法。

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HEK293 ExoBoost SF Medium是一款专用于促进HEK293来源外泌体分泌的全悬浮生长培养基，本培养基不含无动物源组分、无水解物、化学成分限定，可高效促进HEK293来源外泌体的分泌。

培养基使用方法

HEK293悬浮细胞培养

1. 细胞培养需要在CO₂环境下震荡培养，可选择CO₂培养箱搭配小摇床或自带CO₂控制系统的摇床。培养条件：温度曲线：37℃±0.5℃、湿度曲线：70%±20%、5% CO₂浓度、120-140rpm。

2. 培养过程中需注意以下三点：

1）保证摇床正常运转；

2）防止外界环境温度过高，导致培养箱内温度失控；

3）防止培养箱内水盘缺水，导致培养箱内湿度过低。

培养基适应

1. 直接适应：最初培养阶段，细胞按初始密度 0.7×10⁶ cells/mL 接种，直接将培养基更换为A-EXO004进行细胞培养。待细胞培养2-3代，且细胞生长稳定后进行后续实验。

2. 间接适应：保持初始接种密度为0.7×10⁶ cells/mL。细胞培养过程中逐步减少原培养基直至完全在A-EXO004培养基中培养。原培养基与A-EXO004比例推荐为（75:25、50:50、25:75、10:90、最终为100% A-EXO004培养基），每个阶段至少适应3代，细胞生长稳定后进行后续实验。

3. 注意事项

1) 根据细胞具体情况选择培养基直接适应或者间接适应。

2) 细胞驯化初期，若出现密度低、结团等不稳定状态，根据密度选择合适的传代方式。

a. 稀释传代：根据细胞密度计算传代时所需细胞悬液，去除多余细胞悬液并补加新鲜培养基。

b. 离心传代：根据细胞密度计算传代时所需细胞悬液，800rpm（114g）离心5min，去除上清，用新鲜培养基重悬细胞。

4. 细胞正常状态传代：

不同计数方式可能存在差异，建议使用Countstar细胞计数仪。

推荐外泌体生产工艺

1. 种子细胞准备。取生长稳定的悬浮细胞，测量细胞密度和活率（活率应大于90%）；

2. 接种细胞。按0.5-0.8×10⁶cells/mL密度接种到新的细胞摇瓶，将摇瓶放入摇床中培养；

3. 细胞生长状态监测。细胞接种培养72h后，每12-24h测量一次细胞密度和活率；

如果期望得到更多的外泌体，在细胞培养72h后，可补充一些细胞营养物质。1） 添加1mL HEK293 Enhance Feed Medium（货号A-EXO001）补料培养基（5%的总体积）；或者2）添加终浓度为3g/L葡萄糖、6-8mM 谷氨酰胺。

4. 收获外泌体。当细胞活率低于85%时，停止培养，收获培养上清，纯化后得到外泌体。

培养基从4℃冰箱取出必须恢复到室温后使用。

每次摇瓶取出进行转染或计数等操作后，应尽快放回摇床，切勿长时间室温放置。

HEK293悬浮细胞冻存

1. 待细胞恢复至正常状态后，扩大细胞培养体积准备冻存建库。尽量多建细胞库，保证备份充足。

2. 选择处于对数生长期、活率＞90%的细胞冻存，冻存密度:10-15×10⁶ cells/mL，推荐15×10⁶ cells/mL。

3. 准备冻存盒：向程序降温盒注入适量异丙醇，置于4℃冰箱预冷。

4. 配制冻存液：冻存液 = 细胞培养基 + 10% FBS(建议使用进口胎牛血清) + 10% DMSO，冻存液配好后置于4℃冰箱预冷（冻存液配制时，先加培养基再加血清或DMSO，防止DMSO浓度过高导致血清有效成分变性）。

若选择无血清冻存方案，推荐的冻存液配方：92.5% 培养基 + 7.5% DMSO。

5. 取细胞悬液，800rpm（114g）离心5min，弃上清，用细胞冻存液重悬细胞，调整细胞密度至目标值。

6. 快速分装细胞液至冻存管中。

7. 将冻存管放入程序降温盒中，放于-80℃冰箱，24h后转至液氮罐中储存。一段时间后复苏检测。

HEK293悬浮细胞复苏

1. 预热培养基：取20mL对应培养基置于摇瓶中，放入37℃二氧化碳培养箱中预热30min以上（平衡培养基pH值），保证预热充分。

2. 将冻存管从液氮保存罐或-80℃冰箱中取出，迅速转移至37℃水浴中，快速摇晃，直至完全融化。

3. 取预热的培养基5mL于无菌离心管中，并将解冻后的细胞悬液移入此离心管中。800rpm（114g）离心5min（除去冻存液中DMSO）。

4. 弃上清，用15mL预热的培养基重悬细胞，移回相应摇瓶，放于培养箱中悬浮培养。

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