Worthington：氨基酸氧化酶，D-：从代谢物测定到生物传感器的开发

D-氨基酸氧化酶（DAAO）是一种氧化还原酶，它将D-氨基酸氧化脱氨基为相应的α-酮酸。DAAO是一种黄酶，每单体含有1摩尔FAD。

特异性

D-型脯氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸是良好的底物（Scannone等人1964年，Dixon和Kleppe 1965b年）。据报道，该酶作用于L-脯氨酸（Wellner和Scannone 1964年）和D-乳酸（Yagi和Ozawa 1964b年）。pkDAOO的最佳底物是D-脯氨酸，而DAAOs对D-天冬氨酸表现出非常低或没有活性（Tishkov和Khoronenkova 2005年）。

不同物种的DAAOs一级结构中的底物结合域没有显示出高度同源性。这可能反映了不同来源的DAAOs在特异性上的广泛变化（Tishkov和Khoronenkova 2005年）。

组成

活性pkDAAO全酶是一个由347个氨基酸组成的单体，可以发生二聚化。单体比二聚体更具活性，并且每个单体含有1摩尔非共价结合的FAD。截至2000年，所有已表征的DAAOs都含有非共价结合的FAD作为它们的辅助基团（Pilone 2000年）。

分子特征

编码哺乳动物DAAO的基因在基因组中只有一个副本。一个1041 bp的开放阅读框架编码了酶的所有347个氨基酸。这表明没有发生由蛋白酶催化的翻译后加工（Fukui 1987年）。

猪D-氨基酸氧化酶的一级结构由Ronchi等人（Ronchi等人1982年）确定，基因由Momoi等人（Momoi等人1988年）克隆。在不同来源的DAAOs中，一级结构中有六个区域高度保守（Faotto等人1995年）。区域I包含共识序列GXGXXG，区域I和III已被发现涉及辅酶结合（Wierenga等人1983年）。区域II、IV和V包含活性位点残基。Ser-Lys/His-Leu末端序列是过氧化物酶体靶向信号序列（Subramani 1993年，Pilone 2000年）。

哺乳动物DAAOs显示出63%的同一性，而三种已知的微生物DAAOs（R. gracilis、T. variabilis和Fusarium solanii）显示出18%的同一性。酵母和哺乳动物DAAOs之间观察到30%的同一性（Pilone 2000年）。

艾美捷Worthington氨基酸氧化酶，D-（9000-88-8）的应用：

酮酸制备

氧化还原研究

从外消旋混合物中分离L-氨基酸

FAD测定

D-丙氨酸测定

生物传感器（Inaba等人2003年）

D-氨基酸氧化酶的特性：

CATH分类

类别：Alpha Beta

架构：2层三明治和3层（aba）三明治

拓扑：D-氨基酸氧化酶；链A，第2个结构域和Rossmann折叠

分子量：78.7 kDa（理论）

单体：38.0-39.0 kDa（Curti等人1973年，Tu等人1973年）

最佳pH值：

取决于底物：D-丙氨酸约为9（Dixon和Kleppe 1965c年）。

等电点：7.0，7.2（Tishkov和Khoronenkova 2005年）

消光系数：

75,420 cm-1 M-1（理论）

E1%,280 = 19.17（理论）

活性位点残基：

酪氨酸（Y224）

天冬氨酸（D228）

精氨酸（R283）

（Pilone 2000年）

抑制剂：

2-羟酸，2-酮酸和2-氧丁酸（Dixon 1965b年）

代谢产物和药物（Hamilton和Buckthal 1982年）

腺苷5'-单磷酸和苯胺（Yagi等人1972c年）

苯甲酸（Pollegioni等人2007年）

苯甲酸钠（Nguyen等人2009年）

文献参考：

Aki, K. , Tagagi, T. , Isemura, T. and Yamano, T.

Optical Rotatory Dispersion and Circular Dichroism of D-Amino Acid Oxidase , Biochim Biophys Acta 122 , 193 , 1966

Alston, T. , Porter, D. and Bright, H.

Suicide Inactivation of D-Amino Acid Oxidase by 1-Chloro-1-Nitroethane , J Biol Chem 258 , 1136 , 1983

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