WRN解旋酶活性测定试剂盒，荧光测定检测方案

WRN解旋酶活性测定试剂盒是一种荧光测定法，旨在通过监测WRN（Werner综合征ATP依赖性Helicase）拮抗剂/抑制剂对WRN催化的DNA解旋的影响来筛选和分析WRN拮抗剂/抑制剂。WRN Helicase活性检测试剂盒采用方便的96孔格式，含有足够的纯化重组WRN、ATP、DNA底物、检测缓冲液和添加剂，可用于100个反应。

艾美捷WRN解旋酶活性测定试剂盒：

货号: BPS-78852

同义词：双功能3'-5'外切酶/ATP依赖性解旋酶WRN，DNA解旋酶，RecQ样型3，RecQ蛋白样2，Werner综合征蛋白，ATP依赖性解旋酶，3'-5'外切酶，RECQ3，RECQL2

检测试剂盒格式：荧光法

物种：人类

需自备材料：能够读取激发波长/发射波长=525 nm/592 nm的荧光微孔板阅读器。

UniProt ：#Q14191

储存/稳定性：如果按照指示储存材料，该检测试剂盒从收到之日起最佳性能可维持长达6个月。

应用：筛选影响WRN解旋酶活性的小分子抑制剂或拮抗剂，在高通量筛选（HTS）应用中。

运输温度：-80°C

注：反应中DMSO的最终浓度不应超过1%。

WRN解旋酶活性测定试剂盒检测协议：

所有样品和对照应成对进行。

检测应包括“阴性对照”、“阳性对照”和“试验抑制剂”条件。

我们建议在实验中将稀释后的蛋白质保持在冰上。

有关蛋白质处理的详细信息，请参阅蛋白质常见问题解答(bpsbioscience.com)。

我们推荐使用HRO761作为内部对照。如果不对控制抑制剂进行剂量反应曲线测试，我们建议按照下面验证数据中显示的IC50值的0.1倍、1倍和10倍来运行控制抑制剂。

准备4倍浓缩WRN缓冲液：向4毫升4倍WRN缓冲液中加入40微升0.5M DTT并混匀。

准备1倍WRN缓冲液：用蒸馏水将1毫升4倍浓缩WRN缓冲液稀释4倍。混匀。

在冰上解冻WRN。短暂离心含有蛋白质的管子以回收管子的全部内容物。

将WRN用1倍WRN缓冲液稀释至5纳克/微升。每个孔需要40微升。

向“阳性对照”和“试验抑制剂”孔中各加入40微升稀释后的WRN。

向“阴性对照”孔中加入40微升1倍WRN缓冲液。

准备试验抑制剂（每个孔5微升）：对于滴定，准备比期望最终浓度高10倍的连续稀释。反应的最终体积为50微升。

向“试验抑制剂”孔中加入5微升试验抑制剂。

向“阴性对照”和“阳性对照”孔中各加入5微升溶剂溶液。

轻轻晃动板子，然后在室温(RT)下孵育15-20分钟。

解冻ATP（200 mM）并保持在冰上。

将ATP在1倍WRN缓冲液中稀释5倍至40 mM浓度。每个孔需要2.5微升。注意：将未使用的ATP分装成单次使用的小份，并立即存放在-80°C。

在冰上解冻WRN底物。短暂离心含有WRN底物的管子以回收管子的全部内容物。

将WRN底物在1倍WRN缓冲液中稀释12.5倍。每个孔需要2.5微升。注意：将未使用的WRN底物分装成单次使用的小份，并立即存放在-80°C。

准备主混合物，按1:1的比例混合稀释后的ATP（40 mM）和稀释后的WRN底物，如下：N个孔 × （2.5微升稀释后的WRN底物 + 2.5微升稀释后的ATP）。

通过向所有孔中加入5微升上述制备的主混合物来启动反应。

轻轻晃动板子，并立即放入能够读取λexc/λem=525 nm/592 nm的荧光微孔板阅读器中。

在25分钟后读取终点荧光，或在加入主混合物后使用动力学模式读取几个时间点。推荐的时间间隔为5分钟。

通过从其他值中减去“阴性对照”的值来计算结果。

WRN解旋酶活性测定试剂盒示例结果：

图:WRN的滴定。在WRN和2 mM ATP含量增加的情况下测量荧光。