小鼠抗Sm总Ig ELISA试剂盒是一种穆诺斯塞适用于定量或滴定总抗体活性(IgG、IgA血清或血浆中Sm(Smith)抗原特异性抗体(IgM)。其他生物流体,包括组织培养基,可以是已验证使用。
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小鼠抗 Sm Ig(总 (A+G+M) ELISA 试剂盒,96 次检测,定量 | ADI-5405 | 查看 |
小鼠抗 Sm Ig(总 (A+G+M) ELISA 试剂盒,96 次检测,定量检测原理:
小鼠抗Sm总Ig ELISA试剂盒基于小鼠抗Sm免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的检测动员起来在微孔上,通过与HRP结合的抗鼠IgG+IgA+IgM(H+L)特异性抗体检测总抗Sm抗体(辣根过氧化物酶)酶。在洗涤步骤之后,加入显色底物(TMB),通过以下方式显色
HRP在底物上的酶反应,直接与样品中存在的抗Sm-Ig的量成比例。加入终止溶液以终止反应,以及然后使用ELISA测量450nm处的吸光度微孔阅读器。样本中小鼠总抗体的活性相对于鼠标抗Sm校准器计算。
特异性
使用纯化的SMA(Smith抗原)包被微孔板,因此检测特异性针对SMA的抗体。抗小鼠IgG+IgA+IgM(H+L)HRP偶联物与小鼠IgG、IgA和IgM类别的抗体反应,这些抗体能够与板上的Sm结合。IgE抗体不会在背景信号之上被测量。
检测灵敏度
SMA包被水平、HRP偶联物浓度和低非特异性结合(NSB)样品稀释液被优化,以区分1:100稀释的小鼠血清样本中的抗Sm Ig与背景(非抗体)信号。
校准品值
校准品是对SMA有反应的小鼠抗体的稀释液。值被赋予为任意的抗Sm活性单位(见检测限制)。
试剂盒内容
如果未开封,微孔板和其他所有试剂在2-8°C下稳定,直至盒标签上打印的有效期。工作溶液的稳定性在试剂准备下指示。
需自备的材料:
能够提供100ul和1-10ml的移液器和移液管。推荐使用多通道移液器。
一次性玻璃或塑料0.5-15ml管,用于稀释样品和抗小鼠Ig HRP浓缩液。
用于稀释洗涤浓缩液的量筒;0.2至1L。
用于储存稀释洗涤液的储液瓶;200ml至1L。
用于稀释试剂浓缩液的蒸馏水或去离子水。
450纳米波长的微孔板读取器。
结果计算
考虑几种数据简化方法,以最佳代表实验组和对照组之间的关系,确定阳性免疫和阴性非免疫,以及定量阳性抗体水平。
方法A. 抗体活性[ELISA信号与样品稀释]
将数据表示为净OD单位(A450信号;空白减去)÷稀释 = 总活性单位。
可以使用中OD范围的校准值(例如,200 U/ml)来标准化不同检测间的值。
方法B. 阳性指数
实验样本值可以通过计算阳性指数与对照或非免疫样本值相对应。一种典型的方法是:
计算对照/非免疫样本的净OD均值 + 2 SD = 阳性指数。
将每个样本的净OD除以阳性指数。 高于1.0的值是阳性抗体活性的度量;低于1.0的为抗体阴性。 如果样本值显著高于预免疫血清样本或适当确定的非免疫样本组或样本池的值,并且在相同的样本稀释下进行测试,则该样本值将为阳性。这种计算量化了阳性抗体活性水平。
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