细胞外基质（ECM）蛋白筛选试剂盒--成功应用于多种细胞系

细胞外基质蛋白种类多样，不同蛋白间还可以互相组合为体外细胞培养创造有利条件。但是也正是因为这种多样性，也为体外培养细胞选择合适的细胞外基质蛋白带来巨大挑战。作为2D/3D细胞培养专家，Advanced BioMatrix带来了 ECM Select Array试剂盒，允许您在36种ECM蛋白组合上培养细胞，帮助您找到适合您细胞的细胞外基质(ECM)蛋白。

艾美捷细胞外基质（ECM）蛋白筛选试剂盒（5170）的应用：

细胞外基质筛选阵列，可帮助您找到适合您细胞的细胞外基质(ECM)蛋白（已成功应用于MCF-7、CHO、HUVEC、成纤维细胞、MG-63、Jurkat细胞等细胞系，以及小鼠心脏祖细胞、新生大鼠心肌细胞、人寡突触前体细胞等原代细胞，使用此方案。）

细胞外基质（ECM）蛋白筛选试剂盒实验流程：

1. 将细胞接种到载玻片上

1.1在5ml完整的培养基中准备250000个所需细胞(50,000个细胞/毫升)。

1.2从-20℃的冰箱中取出ECM Select? Array Kit Ultra-36，并放置在无菌层流罩下。打开铝箔袋并取出其中的组分。首先，从塑料袋中取出细胞培养板，并取下盖子。然后打开载玻片支架上的盖子，轻轻取出载玻片。将载玻片放入细胞培养板的一个小隔间中。在取出载玻片时要小心，使用无菌技术，如戴无菌手套或使用无菌镊子，并只触摸载玻片的边缘。确保印刷的斑点面朝上（载玻片上的数字和字母应清晰可见）。

1.3在载玻片上加入5ml无菌PBS。确保整个载玻片浸泡在PBS溶液中，避免在载玻片下方困住气泡。轻轻摇动载玻片几次，然后吸出PBS溶液。注意：不要触摸载玻片表面。

1.4加入5ml所需的培养基（用于细胞培养的相同培养基），确保整个载玻片浸泡在培养基中。轻轻摇动载玻片几次，然后吸出培养基溶液。注意：不要触摸载玻片表面。

1.5 通过轻轻上下移液混合准备好的25万个细胞，然后立即将细胞直接加到载玻片上。在向载玻片上分配细胞时，同时来回移动移液管，均匀分布细胞。注意：不要触摸载玻片表面。将盖子放回培养皿上。

1.6小心地将含有载玻片的4孔板转移到孵育箱中，在37℃、5% CO2条件下过夜培养细胞（至少12小时，以确保细胞有效附着，最长可达3天）。

注意：从载玻片支架上取下载玻片时，载玻片表面可能可见阵列斑点。用PBS/培养基洗涤后，这些斑点可能会消失。这是正常现象，不会影响ECM阵列的性能。

注意：对于细胞系，12小时应足以看到细胞附着。对于新鲜从组织中分离出的细胞或之前被冷冻的细胞，可能需要最多2天才能看到明显的细胞附着。

注意：如果需要进行细胞增殖研究，请减少细胞数量，以便在斑点上留出额外空间供细胞分裂。建议根据细胞的大小和形态，从10万到15万个细胞开始。细胞越大，所需的细胞数量就越少。

2. 在载玻片上清洗和观察细胞

2.1经过至少12小时的孵育后，从培养箱中取出培养板，将培养板放在相差显微镜下观察，从5倍物镜开始。轻轻来回移动培养板，区分非粘附的漂浮细胞和附着细胞。

注意：由于ECM Select?载玻片上的水凝胶表面具有不易粘附的特性，细胞会优先附着到打印有适当细胞外基质的斑点上。细胞被限制在斑点内。

2.2吸去非粘附的漂浮细胞，确保不扰动载玻片表面。每次用5ml培养基洗涤载玻片两次，然后将载玻片留在5ml培养基中。

2.3在相差显微镜下观察每个斑点块的细胞附着情况。每个块代表一个具有9个复制点的唯一ECM。

2.4在这个阶段，细胞可以固定，也可以在载玻片上再培养3天。

3. 在载玻片上固定细胞

3.1通过吸去培养基，去除载玻片上的培养细胞。用含Ca2+和Mg2+的冷1倍Hank's平衡盐溶液（HBSS）两次洗涤载玻片上的细胞，每次用5ml。

3.2通过在1倍PBS溶液中加入4%的冷聚甲醛（PFA）来固定载玻片上的细胞。将载玻片放入4℃的PFA溶液中5分钟，然后在室温下额外固定10分钟。

3.3去除PFA溶液，然后用1倍HBSS溶液每次洗涤载玻片两次，每次用5ml。载玻片可以存放在4℃的1倍HBSS溶液中以备将来染色，或者可以立即处理。

4. 在载玻片上进行细胞核和免疫染色

4.1可以使用许多可用的核染色试剂对载玻片上的细胞进行染色，如DAPI、PoPo-3、DraQ等。

4.2对于特定抗体染色，请按照制造商的说明进行免疫细胞化学稀释建议。

4.3完成染色后，用5ml细胞培养水每次洗涤载玻片两次，每次5分钟。然后将载玻片从培养皿中取出，放在暗处的架子上晾干。

4.4载玻片可以直接放入荧光显微镜中观察。

注意：不要使用任何封片介质，如Vectashield。

注意：不要使用倒置位置进行观察，这通常用于油镜头。