前列腺素E2（PGE2）ELISA试剂盒样本的收集准备及注意事项

Cayman Chemical的前列腺素E2（PGE2）单克隆ELISA试剂盒是一种竞争性检测，可用于尿液、血浆、组织培养上清液以及其他样本基质中PGE2的定量分析。该检测的范围为7.8-1,000 pg/ml，灵敏度（80% B/B0）约为13 pg/ml，最低检测限（LLOD）为11 pg/ml。本品不适用于人类或兽医用途。

艾美捷前列腺素E2（PGE2）ELISA试剂盒：

货号：514010

同义词：PGE2 EIA试剂盒 - 单克隆

检测范围：7.8-1,000 pg/ml

灵敏度：80% B/B0：13 pg/ml

中点：50% B/B0：30-70 pg/ml

来源：动物/牛，动物/鳗鱼，动物/山羊，动物/小鼠

储存：-20°C

运输：在美国本土使用湿冰；其他地方可能有所不同

稳定性：≥ 1年

前列腺素E2（PGE2）ELISA试剂盒检测原理：

这个检测基于PGE?和一个PGE?-乙酰胆碱酯酶（AChE）偶联物（PGE?追踪器）对有限数量的PGE?单克隆抗体的竞争。由于PGE?追踪器的浓度保持恒定，而PGE?的浓度变化，能够与PGE?单克隆抗体结合的PGE?追踪器的量将与孔中PGE?的浓度成反比。这种抗体-PGE?复合物与之前已经固定在孔中的山羊多克隆抗小鼠IgG结合。然后对板进行洗涤以去除任何未结合的试剂，接着添加Ellman试剂（其中包含AChE的底物）到孔中。这种酶促反应的产物有一种明显的黄色，并且在412纳米处有强烈的吸收。这种颜色的强度，通过分光光度法测定，与孔中结合的PGE?追踪器的量成正比，这反过来与孵育期间孔中存在的游离PGE?的量成反比；或者吸光度 c [结合的PGE?追踪器] c 1/[PGE?]。

样本准备：

这项检测已经针对包括尿液、血浆和组织培养液在内的广泛样本类型进行了验证（见下图）。正确的样本储存和准备对于获得一致和准确的结果至关重要。在开始检测之前，请彻底阅读本节。

一般注意事项：

所有样本在检测前必须不含有机溶剂。

样本应在收集后立即进行检测；不能立即检测的样本应储存在-80℃。

鼠和小鼠来源的样本可能含有干扰检测的抗体，它们可能通过与山羊抗鼠板结合来干扰。我们建议所有鼠和小鼠样本在使用此检测之前进行纯化。

尿液

由于尿液中的干扰不常见，1:2及更高比例的稀释显示出PGE?免疫反应性与PGE?浓度之间的直接线性相关性。然而，正常尿液中PGE?的含量与其他潜在的免疫活性代谢物相比非常低。使用我们的PGE代谢物酶联免疫吸附测定试剂盒（货号514531），可以获得更准确的PGE?生物合成和排泄指标。

血浆

收集含有肝素、EDTA或柠檬酸钠的真空采血管中的血液。在全血收集后应立即添加吲哚美辛（足够达到最终浓度10微摩尔）。吲哚美辛将阻止体外环氧二十碳烯酸的生成，这些物质有可能干扰此检测。

正常血浆中PGE?的含量与其他潜在的免疫活性代谢物相比非常低。此外，血浆是一个复杂的基质，含有许多可能干扰此检测的物质，因此建议对样本进行纯化。通过纯化大量样本（5-10毫升），可以将PGE?含量浓缩至仅0.5毫升的酶联免疫吸附测定（ELISA）缓冲液中。这将使PGE?浓度进入标准曲线的可读范围。使用我们的PGE代谢物酶联免疫吸附测定试剂盒（货号514531），可以获得更准确的血浆中PGE?生物合成指标。

图.PGE?测定的验证曲线

培养基样品

细胞培养上清液可以直接测定，无需纯化。如果培养基中的PGE?浓度足够高，可以用ELISA缓冲液将样品稀释10倍，则可以在不进行任何修改的情况下进行测定。当使用浓度较低的样品（样品不能用ELISA缓冲液稀释）时，在与实验中使用的培养基相同的培养基中稀释标准曲线。这将确保标准的矩阵与样品具有可比性。我们建议首先运行标准曲线，以确保该试剂在特定的培养基中表现良好。

组织样本

收集后立即在液氮中快速冷冻组织，然后在-80℃下储存。向1 g组织中加入5 ml匀浆缓冲液（0.1 M磷酸盐，pH 7.4，含有1 mM EDTA和10μM吲哚美辛）。用Polytron型均质器或声波仪均质化样品。继续进行下面的净化部分。或者，冷冻样品可以在乙醇存在下粉碎，以提取PGE?。

使用Precellys 24均质机进行组织均质化

收集后立即在液氮中快速冷冻组织，并在-80℃下保存。每100 mg组织添加1 mM高均化缓冲液（0.1Mp磷酸盐缓冲液，pH7.4，含有1 mM EDTA和10μM吲哚美辛）。使用适当的设置用Precellys 24均质化样品（见表1）。将组织匀浆以8000克的速度旋转10分钟。收集上清液并按照下文所述进行分析。样品需要适当稀释以进行测定。组织样本应使用蛋白质测定法进行标准化。Cayman的蛋白质测定试剂盒（项目编号704002）可用于使蛋白质样本标准化。