表观遗传之RNA甲基化——m6A甲基化

       大家小长假或者放假在家，没事应该都会刷刷电视剧，来消磨时间....啊不对，是放松身心，让我们的身体通过娱乐获得满满的能量~~ 不过呢，我们娱乐完了要开始学习啦，今天我们继续给大家放送表观遗传相关的产品，前面两集是关于表观遗传之DNA甲基化的，今天给大家带来表观遗传之RNA甲基化。

      前面给大家讲了DNA甲基化，DNA甲基化是通过DNA甲基转移酶在胞嘧啶环的第5个碳原子上共价加成甲基而产生的，从而产生5-甲基胞嘧啶（5-mC）。那么什么又是RNA甲基化呢？

       一 RNA甲基化相关概念

      RNA甲基化是RNA的可逆翻译后修饰，其表观遗传地影响许多生物过程。它发生在不同的RNA中，包括tRNA，rRNA，mRNA，tmRNA，snRNA，snoRNA，miRNA和病毒RNA。不同的RNA-甲基转移酶具备相应的催化策略，用于RNA甲基化。

      RNA甲基化主要的修饰类型有两三种：一种是6-甲基腺嘌呤（m6A），是在存在于真核生物的RNA分子中最常见的和丰富的甲基化修饰和占所有RNA甲基化的80％以上。它可以被称为“第五RNA碱基”并且在调节胚胎发育和细胞命运中具有广泛的作用。

      另一种是5-mC，5-甲基胞嘧啶（5-mC）是一种表观遗传标记，通常也出现在各种RNA分子中。有证据表明，RNA胞嘧啶甲基化会影响各种生物学过程，例如RNA稳定性和mRNA翻译。

      最后一种是m1A RNA甲基化，它普遍存在于非编码RNA和mRNA中。m1A RNA甲基化功能，目前发现tRNA上发生多种m1A修饰，可能参与翻译调控。

      今天就跟大家讲讲RNA m6A甲基化。

       二 m6A甲基化

      N6-甲基腺苷（m6A）-真核生物中存在的RNA分子中最常见和最丰富的甲基化修饰。 被称为“第五个RNA碱基”的m6A RNA修饰是可逆的，高度动态的，并且可能起着与DNA甲基化和组蛋白修饰相当的重要生物学作用。

      Epigentek可提供m6A研究相关的产品，主要有m6A RNA定量试剂盒，甲基化酶和去甲基化酶活性/抑制剂分析试剂盒，以及相关的抗体。

【操作指南】m6A RNA甲基化定量检测试剂盒（cat#P-9005）

      【1】m6A RNA甲基化定量检测试剂盒

      【2】Epigenase m6A甲基酶活性/抑制分析试剂盒

      【3】m6A RNA甲基化抗体

      图左：The N6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody tested in dot blot against total RNA of Arabidopsis

      图右ELISA performed at1:1000 dilution usingN6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody

      图左：The m6A rabbit monoclonal antibody was tested in Dot Blot against N6-methyladenosine (m6A) and unmodified adenosine.

      Oligomer 8 -ATAACTGG-m6ACCGAATGG

      Oligomer 9 -ATAACTGGACCGAATGG

      Oligomer 10 -AAAAAAAAAAAAAAAAbiotin.

      图右：U2OS cells pre-treated with BrdU were subjected to UVC irradiation incubated at 37 °C for the indicated time, and stained for N6-methyladenosine (m6A) Monoclonal Antibody. DAPI, 4’, 6-diamidino-2-phenylindole. Global UVC irradiation exceed cytoplasmic level, peaking at 2 min after irradiation and diminishing over the following 8 min.

      【4】MeRIP & m6A-seq产品

      通过富集存在少量m6A的部分基因组来鉴定m6A修饰。 然后通过构建文库，为下一代测序准备这些片段。 我们独特的方法称为CUT＆RUN RNA m6A富集（在目标下切割，并使用核酸酶富集RNA m6A进行回收），仅在抗体结合位置分离RNA片段，同时在目标下捕获和切割。 这种简化的过程仅需几个小时即可将RNA提取到cDNA文库。

      p-9018 EpiQuik CUT&RUN m6A RNA Enrichment Kit ：基于CUT＆RUN的MeRIP可提高特异性和信号。

      p-9016 EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Seq Kit：基于CUT＆RUN的一体式MeRIP和NGS库准备。

      参考文献：

      Tsuruta K. et. al. et. al. (September 2020). RNA N6-methyladenosine demethylase FTO regulates PD-L1 expression in colon cancer cellsBiochemical and Biophysical Research Communications. 530(1)  p-9005

      Zeng M et. al. (August 2020). Critical roles of mRNA m⁶A modification and YTHDC2 expression for meiotic initiation and progression in female germ cells. 753:144810. p-9008

      以上就是今天的全部内容了啦~~

      下期预告：RNA甲基化——5mC甲基化，大家敬请期待噢~~

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