GLP-1（活性7-36）ELISA试剂盒检测原理和操作注意事项说明

GLP-1（活性7-36）ELISA试剂盒高灵敏度试剂盒用于定量测定血浆样本中的生物活性胰高血糖素样肽-1（7-36）[GLP-1（7-36）]水平。GLP-1肽的主要氨基酸序列在哺乳动物物种中是相同的，即大鼠、小鼠、猪、人等。该试剂盒仅供研究使用。不用于诊断程序。

艾美捷GLP-1（活性7-36）ELISA试剂盒（ALP-43-GP1HU-E01）检测原理：

本ELISA试剂盒旨在用于定量测量血浆样本中的生物活性GLP-1（7-36）。该检测采用双位点“夹心”技术，使用两种选定的GLP-1（7-36）特异性抗体。标准品、对照品和测试样本直接加入到已涂有链霉亲和素的微孔板孔中。随后，向每个孔中加入生物素标记的GLP-1（7-36）特异性抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的GLP-1（7-36）特异性抗体的混合物。在第一次孵化期后，形成“链霉亲和素 – 生物素抗体 – GLP-1(7-36) – HRP标记抗体”的“夹心”免疫复合物，并附着在板壁上。在随后的洗涤步骤中去除未结合的HRP标记抗体。为了检测这种免疫复合物，每个孔随后与底物溶液孵育，在定时反应后，使用分光光度计微孔板阅读器进行测量。与微孔板孔壁上GLP-1（7-36）结合的免疫复合物的酶活性与样本中GLP-1（7-36）的含量成正比。

试剂：配制和储存

试剂盒在收到后必须存放在2-8°C。有关试剂盒的有效期，请参考试剂盒盒上的标签。所有组分在有效期前都是稳定的。

1. 链霉亲和素包被微孔板（10040B）

涂有链霉亲和素的微孔板。

数量：1 x 96孔微孔板

储存：2-8°C

配制：即用型

2. GLP-1追踪抗体（30229）

稳定蛋白质基质中HRP标记的抗GLP-1特异性抗体。

数量：1 x 0.6 mL

储存：2-8°C

配制：使用前必须与GLP-1（7-36）捕获抗体（30230）和追踪抗体稀释液（30017）混合。

3. GLP-1（7-36）捕获抗体（30230）

生物素标记的GLP-1（7-36）特异性抗体。

数量：1 x 0.6 mL

储存：2-8°C

配制：使用前必须与GLP-1追踪抗体（30229）和追踪抗体稀释液（30017）混合。

4. ELISA洗涤浓缩液（10010）

含有非氮化物防腐剂的磷酸盐缓冲液中的表面活性剂。

数量：1 x 30 mL

储存：2-8°C

配制：30倍浓缩。使用前必须用870 mL的蒸馏水稀释并充分混合。

5. ELISA HRP底物（10020）

含有稳定过氧化氢的四甲基联苯胺（TMB）。

数量：1 x 24 mL

储存：2-8°C

配制：即用型

6. 终止溶液（30357）

1.0 M 硫酸。

数量：1 x 12 mL

储存：2-8°C

配制：即用型

7. GLP-1校准品1至6级（30441 – 30446）

含有非氮化物、非汞基防腐剂的液体蛋白质基质中冻干的GLP-1（7-36）。

数量：6 x 瓶

储存：2-8°C（冻干），<-20°C（重组）。不要超过三次冻融周期。

配制：必须用1 mL的蒸馏水重组，静置10分钟，然后通过翻转或轻轻涡旋混合。使用前确保所有固体完全溶解。

8. GLP-1对照品（30447 – 30448）

含有非氮化物、非汞基防腐剂的液体蛋白质基质中冻干的GLP-1（7-36）。

数量：2 x 瓶

储存：2-8°C（冻干），<-20°C（重组）。不要超过三次冻融周期。

配制：必须用1 mL的蒸馏水重组，静置10分钟，然后通过翻转或轻轻涡旋混合。使用前确保所有固体完全溶解。

9. 追踪抗体稀释液（30017）

用于追踪抗体稀释

数量：1 x 12 mL

储存：2-8°C

配制：即用型。

操作注意事项：

1. 未能按照上述方法收集样本可能会导致由于内源性DPP4活性而出现错误结果。

2. 建议所有标准品、对照品和未知样本都要进行双份检测。应使用每份重复的平均吸光度读数进行数据分析和结果计算。

3. 对于浓度高于6级标准品的样本，建议使用适当的无GLP-1缓冲基质（例如标准零）进行稀释，以获得更准确的结果。

4. 光敏感试剂应保存在原始的琥珀色瓶中。

5. 将未使用的链霉亲和素包被条存放在带有干燥剂的铝箔拉链袋中，以防止受潮。

6. 仔细的技术和正确校准的移液设备对于确保测试的可重复性是必要的。

7. 与本说明书中所述不同的孵化时间或温度可能会影响结果。

8. 避免在微孔中产生气泡，因为这可能会导致结合效率降低和重复读数的变异系数（%CV）增加。

9. 使用前应轻轻且彻底地混合所有试剂，避免产生泡沫。