Cayman Chemical无细胞蛋白质合成（大肠杆菌）试剂盒：易于使用、快速且高效

无细胞蛋白质合成（CFPS）是一个易于使用、快速且高效的系统，它不包含膜结构障碍，但包含了原生细胞的转录和翻译机制以及合成所需蛋白质的外源资源（例如，氨基酸、核苷酸和二级能量底物）。1-5

CFPS（大肠杆菌）套件可以在几小时内产生高水平和不同分子量的重组蛋白，并且可以用于高通量功能基因组学和蛋白质组学。此外，它还可以提供蛋白质以推动生化和结构生物学研究。

合成的蛋白质可以通过SDS-PAGE、西方印迹和荧光检测尺寸排除色谱（FSEC）进行检测，并且可以通过亲和纯化技术从反应混合物中分离出来，以进行进一步的结构和/或功能特性分析。

艾美捷Cayman Chemical无细胞蛋白质合成（大肠杆菌）试剂盒：

货号：41534

同义词：CFPS（无细胞蛋白质合成）

储存：-80°C

运输：在美国本土使用干冰运输；其他地区可能有所不同

稳定性：至少1年

模板制备：

包含DNA的线性或环形质粒或用于POl的PCR产物可以用作模板。环形质粒DNA可以产生相对较高的产量，但在进行高通量筛选时使用PCR产物更为方便。为了获得最佳的蛋白质产量，使用高纯度和高浓度的质粒DNA模板非常重要，并避免在DNA模板中加入高浓度的盐或甘油。此外，建议在蛋白质合成缓冲液中添加适当的核酸酶抑制剂，以抑制任何污染的RNase/DNase并稳定线性DNA。为了方便，可以使用Control His-sfGFP Plasmid（产品编号400793）作为克隆载体。这个高拷贝数载体包含了所需的T7启动子、核糖体结合位点（RBS）和T7终止子元素。sfGFP基因可以被其他感兴趣的基因替换，以用于体外表达。

环形质粒DNA作为模板

在此平台上使用的质粒必须包含以下元素和结构特征：

图：控制His-sfGFP质粒的示意图

目标基因必须位于一个RBS（核糖体结合位点）上游的T7启动子的控制之下。

T7启动子与ATG起始密码子之间的距离应在20到100个核苷酸左右。

T7终止子必须位于终止密码子下游。

文献参考：

1. Silverman, A.D., Karim, A.S., and Jewett, M.C. Cell-free gene expression: An expanded repertoire of applications. Nat. Rev. Genet. 21(3), 151-170 (2020).

2. Garenne, D., Haines, M.C., Romantseva, E., et al. Cell-free gene expression. Nat. Rev. 1, 49 (2021).

3.Levine,M.Z.,Gregprio,N.E.,Jewett,M.C.,et al.Escherichia coli-basedcell-free protein synthesis:Protocols for a robust flexible,and accessibleplatform technology.J.Vis.Exp.144,e58882(2019).

4. Jewett, M.C., and Swartz, J.R. Mimicking the Escherichia coli cytoplasmic environment activates long-lived and efficient cell-free protein synthesis. Biotechnol. Bioeng. 86(1), 19-26 (2004).

5. Davanloo, P., Rosenberg, A.H., Dunn, J.J., et al. Cloning and expression of the gene for bacteriophage T7 RNA polymerase. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 81(7), 2035-2039 (1984).

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