Chondrex FITC-葡聚糖，4kDa 标准品制备方案

荧光异硫氰酸酯（FITC）标记的右旋糖酐。

作为Chondrex在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐Chondrex热销产品FITC-葡聚糖，4kDa。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

FITC-葡聚糖，4kDa：

应用：用于评估半透膜的通透性，可以在体内或体外进行（1-4）。

注意事项：FITC-右旋糖酐可以与TRITC-右旋糖酐（货号4014）同时使用，因为它们在不同的波长下发射荧光。

数量：5毫升。

形式：0.05M磷酸盐缓冲盐水中的25 mg/ml溶液。

分子量：4 kDa。

荧光特性：激发波长：490 nm，发射波长：520 nm。

储存：在暗处于4℃保存。

稳定性：有效期为1年。

体内实验步骤：

在口服喂养前禁食小鼠4小时，并在实验期间保持禁食。

通过口腔灌胃给予20 ml/kg的剂量。

维持禁食状态，等待3小时（根据个体动物可能会有所不同）。

通过眼眶后出血收集血液，然后离心并收集血浆。将血浆与PBS按1:2（或更多）稀释。

注意事项：

样本中的蛋白质可能干扰并降低荧光强度（FI）。因此，为了准确确定FITC-右旋糖酐的通透性，所有样本中血浆与PBS的比例必须一致。

Chondrex, Inc.建议通过对储备FITC-右旋糖酐进行连续稀释，制作标准曲线以进行定性研究。

将50或100 μl稀释后的标准和样本转移至黑色96孔板中，在荧光读数仪中读取。

读数设置：

激发波长：490 nm / 发射波长：520 nm

波长带宽（激发和发射）：9 nm

增益：自动或设置为80,000，相当于12.5 μg/ml

体外实验步骤：

体外研究的协议会因培养细胞的类型、培养系统、研究目的等而有所不同。

图1。FITC葡聚糖的典型标准曲线

制备标准品

建议标准范围为12.5至0.2 μg/ml。为制备标准稀释液，使用与样本相同的正常小鼠血浆与PBS的比例稀释剂。例如，如果样本稀释使用1:2稀释（体内协议，步骤4），则应准备33%的正常小鼠血浆与0.05M磷酸盐缓冲盐水（300 μl血浆与600 μl PBS）作为稀释剂。

将10 μl的25 mg/ml FITC-聚糖与990 μl PBS混合（得到250 μg/ml）。

将12.5 μl稀释后的FITC-聚糖与237.5 μl的33%正常小鼠血浆在0.05M磷酸盐缓冲盐水中混合（得到12.5 μg/ml）。

将125 μl的12.5 μg/ml溶液与等体积的33%小鼠正常血浆混合（得到6.3 μg/ml）。

对于3.1、1.6、0.8、0.4和0.2 μg/ml的标准溶液重复上述步骤5次。

将50或100 μl的稀释标准和样本转移到黑色96孔板上，并在荧光读数仪上读取。

从标准和样本的FI值中减去FI空白值（0.05M磷酸盐缓冲盐水中的33%正常小鼠血浆）。

将标准的FI值与FITC-聚糖标准的μg/ml绘制图表，使用对数/对数图可以线性化数据（见图1）。

文献参考：

1. M. Vijay-Kumar, C. Sanders, R. Taylor, A. Kumar, J. Aitken, et al., Deletion of TLR5 results in spontaneous colitis in mice. J Clin Invest 117, 3909-21 (2007).

2. Q. Wang, C. Fang, P. Hasselgren, Intestinal permeability is reduced and IL-10 levels are increased in septic IL-6 knockout mice. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 281,R1013-23 (2001).

3. 3. W. Huang et al., HMGB1 increases permeability of the endothelial cell monolayer via RAGE and Src family tyrosine kinase pathways. Inflammation 35, 350-362 (2012). 

Chondrex成立于1996年，致力于开发和生产高纯度胶原蛋白、抗胶原蛋白单克隆抗体和多种ELISA试剂盒等产品，为研究人员提供研究类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis ,RA)发病机制和筛选潜在治疗方法所需的工具。Chondrex生产400多种免疫学研究产品，涵盖肾炎、结肠炎和过敏性哮喘等一系列自身免疫性疾病模型。此外，还开发了炎症相关产品，如细菌毒素抗体ELISA、细胞因子检测ELISA等。

作为Chondrex在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的Chondrex产品。