PMA-qPCR/Viability PCR工作原理&相关推荐

PMA是比较中肯的v-PCR 染料，并已在数百份同行评审的论文和大量细菌、真菌和病毒菌株中得到验证。早期研究侧重于细菌中的v-PCR，验证了在数十种不同细菌菌株中的程序，例如大肠杆菌、李斯特菌、军团菌、乳酸杆菌、结核分枝杆菌、衣原体、幽门螺杆菌以及许多其他与人类健康相关的菌株. v-PCR 在细菌中的应用非常广泛，但也有许多引文在酵母和真菌、病毒以及各种其他细胞类型（如古生菌、变形虫和寄生虫）中使用 v-PCR。

已验证的Viability PCR应用实例：

微生物组研究

环境测试

益生菌研究

临床测试

食品和水卫生

葡萄酒发酵

微生物测序

V-PCR的工作原理

PMAxx 和PMA是对DNA具有高亲和力的光活性染料。染料插入dsDNA并在暴露于强烈可见光时形成共价键。该反应通过在纯化过程中去除修饰的DNA和通过DNA聚合酶抑制模板扩增的组合来抑制修饰的DNA模板的PCR扩增。由于染料是细胞膜不可渗透的，当用染料处理含有活细菌和死细菌的样品时，只有细胞膜受损的死细菌才容易受到DNA修饰。在qPCR反应中，死细胞DNA将显示出延迟扩增和比活细胞更高的Ct。

活性PCR染料，如PMAxx 或PMA是膜不渗透的，这使它们具有死细胞特异性。一旦进入死细胞，它们就会与DNA结合。暴露在强烈的可见光下会使染料具有活性，并使它们共价附着在DNA上，这种DNA修饰防止了随后的PCR反应中的扩增。

v-PCR工作流程：

v-PCR的基本工作流程如下图所示（详细协议可在产品页面上找到）。它适用于许多不同的样本类型和实验设置。对于少量培养物，样品可以在微型离心管中制备，并在PMA-Lite 2.0 LED光解装置中暴露在光下。

艾美捷 Viability PCR入门套件

可定制的 Viability PCR 入门套件包含使用 PMA 或 PMAxx 活力染料和 qPCR 选择性检测活细胞所需的材料。这些试剂盒可用于您选择的任何细胞类型（有关已发布的经过验证的细胞类型，请参阅PMA/PMAxx 参考列表和经过验证的细菌菌株列表）。所有试剂盒均包含 Forget-Me-Not EvaGreenqPCR Master Mix，以及您选择的 PMA 或 PMAxx 染料。您还可以选择带有或不带有革兰氏阴性细菌增强剂（不适用于其他细胞类型）的试剂盒。用户将需要提供自己的引物来扩增他们感兴趣的物种（请参阅此 博客文章 用于引物设计考虑）。每个试剂盒包含的试剂足以处理 80 种细菌培养物并进行200次PCR反应。

试剂盒包括：

PMA 染料或 PMAxx 染料

Forget-Me-Not EvaGreen qPCR预混液

ROX 参考染料

PMA 增强剂（仅限革兰氏阴性菌株）

相关推荐：

名称 货号 活性染料

Viability PCR Starter Kit with PMA 31075

Viability PCR Starter Kit with PMAxx 31075-X

Viability PCR Starter Kit with PMA and Enhancer 31076

Viability PCR Starter Kit with PMAxx and Enhancer 31076-X

Biotium公司是一家在荧光技术领域独树一帜的生物技术公司，公司位于美国加利福尼亚的BAY AREA------中外知名首要的生物科技中心。该公司一直致力于开发和生产用于生物医学研究的荧光指示剂及其他特殊生化产品。其产品被广泛应用于细胞生 物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液流动检测及大规模药物筛选等众多领域。Biotium公司专利产品众多，包括已经被广泛使用的实时PCR定量荧光染料EvaGreen、具有划时代意义的凝胶核酸染料Gel Red和GelGreen，以及最新推出的Cheetah Taq热启动酶和CF系列蛋白质标记染料等。 n目前，Biotium已将其许多专利技术授权给一些主要的国际生物技术公司，包括安捷伦、BD生物科学、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。