Biotium的DNA凝胶提取试剂盒是一种基于硅胶旋转柱的DNA提取试剂盒用于从TAE中的琼脂糖凝胶中纯化40bp-40kb DNA片段的试剂盒或TBE缓冲器。每个柱的最大结合能力为10微克DNA。Biotium的DNA凝胶提取试剂盒与GelRed和GelGreen核酸凝胶染色剂,以及其他常用的核酸凝胶污渍。纯化的DNA与常见的下游应用兼容例如转化、测序、PCR和限制性消化。
艾美捷Biotium-DNA凝胶提取试剂盒(31030)组成:
储存和搬运:
将试剂盒储存在室温下。套件组件自日期起稳定一年按照建议存储时收到收据。结合缓冲液含有离液硫氰酸胍盐,具有刺激性。使用手套和其他合适的使用此试剂盒时的实验室保护。漂白剂与硫氰酸胍混合会产生有害的副产品。请勿将凝胶提取试剂盒中的废物与漂白剂。
检测协议:
在使用前,请确保向洗涤缓冲液浓缩液中加入100%未变性乙醇。对于31030-50,向10 mL洗涤缓冲液浓缩液中加入40 mL乙醇。对于31030-250,向55 mL洗涤缓冲液浓缩液中加入220 mL乙醇。离心步骤应在常规台式微量离心机中以17,900 x g(大约10,000 rpm)进行。
1. 使用干净的锋利工具,如手术刀,切除含有感兴趣DNA片段的琼脂糖凝胶切片。称量凝胶切片,记录重量,并将凝胶切片转移到1.7 mL微量离心管中。
2. 向1体积的凝胶切片中加入3体积的结合缓冲液(100 mg大约等于100 μL)。
3. 在50°C下孵化凝胶切片和结合缓冲液10分钟,或直到凝胶切片完全溶解。在此孵化过程中偶尔漩涡混合将加速溶解过程。
4. 在凝胶完全溶解后检查溶液的颜色。如果是黄色,溶液的pH值适合DNA结合到柱子上。然而,如果溶液呈橙色、红色或紫色,只需向溶液中加入少量3 M醋酸钠pH 5.0,直到颜色恢复为黄色。
5. 为了更有效地回收小于500 bp或大于4 kb的片段,向管中加入1体积的异丙醇并混合。
6. 将样品吸入提供的柱子中,放入收集管中,离心1分钟。如果有多余的样品,只需分几轮处理,确保将额外的样品应用到相应的柱子上。
7. 丢弃流穿液,并将现在含有结合DNA的柱子放回收集管中。
8. 向柱子中加入750 μL洗涤缓冲液(确保已加入乙醇),并离心1分钟。
9. 丢弃流穿液,将柱子放回收集管中。再离心1-5分钟以去除柱子中残留的乙醇。
10. 小心地取下柱子,放入干净的1.5 mL微量离心管中。
11. 向柱子中心加入30-50 μL洗脱缓冲液。孵化1分钟,然后离心1分钟以收集纯化后的DNA。
12. 将洗脱的DNA储存在-20°C。
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Biotium致力于开发和生产用于生物医学研究的荧光指示剂及其他特殊生化产品。其产品被广泛应用于细胞生 物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液流动检测及大规模药物筛选等众多领域。艾美捷科技是Biotium的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
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