抗-HAV ELISA定性/定量测试分析&结果评估

抗甲型肝炎ELISA是一种检测甲型肝炎抗体的酶免疫测定法人血清中的病毒。仅供研究使用。不用于诊断程序。

艾美捷抗-HAV ELISA定性/定量（22-HAVHU-E01）检测原理：

抗HAV ELISA是一种假性竞争酶免疫测定。血清或血浆样品被加入到预先涂有灭活HAV抗原的微孔板孔中，并在37°C下孵育2小时。抗-HAV抗体与抗原结合。然后加入结合物（过氧化物酶标记的抗-HAV），并在37°C下再次孵育1小时。抗原的自由结合位点被结合物结合。多余的结合物从板上洗去，加入底物并在室温下孵育30分钟。结合的结合物将底物的颜色改变为蓝色。通过加入终止液来终止反应。颜色变为黄色。在微孔板读取器上测量有色反应产物的吸光度。吸光度与抗-HAV滴度成反比。用于定量测定时，请使用所包含的血清标准品来准备滴定曲线。

结果评估：

首先，使用选定的参考波长（>590 nm）确定的吸光度从450 nm的每个吸光度值中减去，无论选择的评估方法如何。之后，从所有值中减去空白的吸光度（A1/A2）。得到的测量值是所有进一步分析的基础。

抗-HAV ELISA定性/定量测试分析：

为了在人血清样品中定性测定抗-HAV抗体，产品开发过程中创建了一种方法，该方法能够以98.3%（n=801）的灵敏度区分阳性和阴性样品。为此，根据以下公式从阳性对照和阴性对照的信号计算截止值：

截止值 = （阳性对照的平均吸光度 + 阴性对照的平均吸光度） / 2

平均吸光度值高于截止值的样品为阴性。

吸光度值低于截止值的样品为阳性。吸光度在截止值的±10%附近的样品应重新测定。

表1显示了一个示例性测试结果。阴性和阳性对照之间的吸光度差异大于0.4（1.390至0.24）。截止值的计算结果如下：

截止值 = (NK + PK) / 2 = (1.390 + 0.024) / 2 = 0.707

因此，截止值是0.707。这样，所有信号高于这个值的样品被归类为阴性（不含抗-HAV抗体），所有信号低于0.707的样品被评估为阳性（含抗-HAV抗体）。

血清样品1的吸光度大于截止值，因此它是阴性的。血清样品2的吸光度小于截止值，因此它是阳性的。血清样品3的吸光度在0.778 - 0.636（0.707的±10%）范围内，必须在上述示例中重复测定。

表1：定性抗-HAV测定结果示例。

测试有效，因为符合以下条件：

阴性对照（NK）和阳性对照（PK）之间的消光差>0.4

半定量测试分析：

抗体滴度计算

除了使用定义的标准计算抗体含量（mIU/mL）外，还可以通过测定抗体滴度进行半定量分析。在这种ELISA中，使用不同稀释度的未知样品。根据预期的抗体水平，对样品进行稀释。对于这些稀释，使用包含10%阴性血清（VPN）的稀释液。为了确定（截止值）的滴度，使用以下公式：

截止值 = （阳性对照的平均吸光度 + 阴性对照的平均吸光度） / 2

吸光度直接低于截止值的血清稀释度代表抗体滴度。

抗-HAV ELISA定性/定量文献参考：

1) Flehmig, B.: Hepatitis A. Baillière`s Clinical Gastroenterology, Vol.4 No. 3, p. 707,1990.

2) Ambrosch, F. et al.: Comparison of HAV-Antibodies Induced by Vaccination,Passive Immunization, and Natural Infection. Viral Hepatitis and Liver Disease. S.98 (1990). (Editors: Hollinger, Lemon, Margolis, published by Williams and Wilkins, Baltimore; ISBN 0-683-04120-7).

3) Delem, A. et al.: Characterization of the immune response of volunteers vaccinated with a killed vaccine against hepatitis A. Vaccine, Vol. 11, Issue 4, S.479 (1993).

4) Heinricy, U. et al.: Schedule-dependent Immune Response to Hepatitis A Vaccination. Viral Hepatitis and Liver Disease. S. 108 (1990). (Editors: Hollinger,Lemon, Margolis, published by Williams and Wilkins, Baltimore; ISBN 0-683-04120-7).