Chondrex 花生粗提取物（CPE）实验方案

由落花生（Arachis hypogaea）制成的粗提落花生提取物（CPE）在相对于其他食物过敏原方面具有最高的过敏性。已鉴定出11种潜在重要的落花生过敏原。其中，Ara h1、Ara h2、Ara h3和Ara h6被指定为主要落花生过敏原。粗提落花生提取物通常用作生化检测（如西方印迹法和酶联免疫吸附试验，ELISA）的参考蛋白，也是动物过敏模型（如I型超敏反应）中公认的过敏原。

图1. 在非还原条件下进行的12% SDS-PAGE。

艾美捷Chondrex花生粗提取物（CPE）（#20041）：

应用： 可用于ELISA和西方印迹法，也可以作为过敏原研究实验动物中的过敏性疾病或进行体外实验。

数量： 10毫克

溶解度： 在pH 8.0缓冲液中为10毫克/毫升

形态： 冻干粉末

来源： 生花生粉（西班牙花生）

存储： 存放于-20°C。重溶后请勿将产品长时间放置在4°C或室温下。

稳定性： 1年

Chondrex-花生粗提取物（CPE）实验方案：

A. 重要提示：处理IgE抗体溶液

IgE抗体在极低浓度下具有生物活性，因此在处理和稀释IgE抗体时需格外小心。通常，几微克的蛋白质可以通过非特异性疏水性结合吸附到1平方厘米的玻璃或塑料表面。因此，如果将1毫升20 ?g/ml的IgE抗体溶液（不含阻断剂，如PBS）存放在微量离心管中，几乎所有的IgE抗体都会被吸附到管壁上，溶液中将不会残留可检测的IgE抗体。请勿将IgE溶液稀释至低于100 ?g/ml，因为PBS不含阻断剂。可以向PBS中添加适当的阻断剂，例如小鼠血清白蛋白、牛血清白蛋白（BSA）或其他合适的蛋白质。Chondrex, Inc.提供IgE稀释缓冲液（产品编号3009）用于体外和体内实验中IgE抗体的稀释。

B. 体外脱颗粒肥大细胞的检测

1. 培养肥大细胞，如大鼠嗜碱性白血病细胞（RBL-2H3），直到静止期。将细胞以1 x 10^6个细胞/ml的浓度重悬于含15%胎牛血清（FCS）的Eagle最小必需培养基中，并将细胞悬液转移到96孔（200 ?l: 2 x 10^5细胞/孔）或24孔（1 ml: 1 x 10^6细胞/孔）的平底细胞培养板中，在37°C下继续培养至少3小时或过夜。

2. 向孔中添加用含阻断剂的PBS或含FCS的培养基稀释的IgE单克隆抗体（最终浓度：培养基中0-10 ?g/ml的IgE抗体），并孵育24小时。  

注意：IgE抗体可以在细胞培养开始时添加到培养基中，而不是在过夜培养后再添加。在这种情况下，FcεRI的表达可能会显著上调。已有报道指出，在RBL-2H3细胞中，FcεRI的表达在24-48小时内会上调2倍，在骨髓来源的肥大细胞中可上调至32倍。

3. 用PBS洗涤IgE致敏细胞3次。

4. 向96孔板添加200 ?l（或24孔板添加400 ?l）用Tyrode缓冲液稀释的CPE溶液（150 mmol/l NaCl, 2.5 mmol/l KCl, 12 mmol/l NaHCO3, 2 mmol/l MgCl2, 2 mmol/l CaCl2, 1 mg/ml BSA, 1 mg/ml葡萄糖，pH 7.4），在37°C培养1小时（CPE的最终浓度为2 ?g/ml）。

5. 向阴性对照孔中添加200 ?l（在96孔板中）或400 ?l（在24孔板中）溶解在Tyrode缓冲液中的阴性对照抗原，例如BSA（2 ?g/ml），以确定β-氨基己糖酶的自发释放。

6. 向100%对照孔中添加200 ?l（在96孔板中）或400 ?l（在24孔板中）的1% Triton X-100溶于Tyrode溶液中，以确定β-氨基己糖酶的总释放。

7. 使用p-硝基苯基-N-乙酰β-D-葡萄糖胺作为底物检测培养上清液中的β-氨基己糖酶活性。

Chondrex-花生粗提取物（CPE）文献参考：

1. S. Kubo, K. Matsuoka, C. Taya, F. Kitamura, T. Takai, H. Yonekawa, H. Karasuyama, Drastic up-regulation of FceRI on mast cells is

induced by IgE binding through stabilization and accumulation of FceRI on the cell surfaces. J Immunol 167, 3427-34 (2001).

2. L. McKinley, J. Kim, G. Bolgos, J. Siddiqui, D. Remick, Reproducibility of a Novel Model of Murine Asthma-Like Pulmonary Inflammation.

Clin Exp Immunol 136, 224-31 (2004).

3. J. Kim, A. Merry, J. Nemzek, G. Bolgos, J. Siddiqui, D. Remick, et al., Eotaxin Represents the Principal Eosinophil Chemoattractant in

a Novel Murine Asthma Model Induced by House Dust Containing Cockroach Allergens. J Immunol 167, 2808-15 (2001).

Chondrex 致力于开发和生产高纯度胶原蛋白、抗胶原蛋白单克隆抗体和多种ELISA试剂盒等产品，为研究人员提供研究类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis ,RA)发病机制和筛选潜在治疗方法所需的工具。艾美捷科技是Chondrex的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。