AAT Bioquest-荧光法NADP/NADPH比率检测试剂盒,红色荧光解决方案

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是细胞中发现的两种重要辅因子。NADH是NAD+的还原形式，NAD+是NADH的氧化形式。它通过酯键在腺苷酸的2'位添加磷酸基团形成NADP。NADP用于合成代谢生物反应，如脂肪酸和核酸合成，这些反应需要NADPH作为还原剂。传统的NAD/NADH和NADP/NADPH测定是通过监测340 nm处的NADH或NADPH吸收来完成的。这种方法灵敏度低，干扰大，因为该测定是在紫外范围内进行的，需要昂贵的石英微孔板。AAT Bioquest的Amplite?NADP/NADPH比值检测试剂盒为灵敏检测NADP、NADPH及其比值提供了一种方便的方法。系统中的酶在酶循环反应中特异性识别NAD/NADH。无需从样品混合物中纯化NADP/NADPH。酶循环反应显著提高了检测灵敏度。此外，该测定的背景非常低，因为它在红色可见光范围内运行，大大减少了生物样本的干扰。该检测方法具有高灵敏度和低干扰性。Amplite荧光NADP/NADPH检测试剂盒可采用方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，易于自动化，无需分离步骤。

图：Syn、Syn/PFP、沼泽红蜘蛛和沼泽红蜘蛛/PFP的NADPH/NADP+和ATP含量。使用Amplite荧光分析试剂盒15264发现NADP+/NADPH比值。来源：温宇等，《科学进展》第9卷（11）：eadf6772。2023年3月。

艾美捷AAT Bioquest-荧光法NADP/NADPH比率检测试剂盒,红色荧光：

货号 15264

单位尺寸 250次测试

预期用途 仅用于研究（RUO）

风险短语 R20, R21, R22

UNSPSC 12352200

吸光度 576 ± 5 nm

推荐板 透明底部

激发 540 nm

发射 590 nm

截止 570 nm

推荐板 实心黑色

组分A：NADP/NADPH循环酶混合物

2瓶（冻干粉）

组分B：NADPH传感器缓冲液

1瓶（20 mL）

组分C：NADPH标准品

1瓶（167 ?g）

组分D：NADPH提取溶液

1瓶（10 mL）

组分E：NADP提取溶液

1瓶（10 mL）

组分F：NADP/NADPH对照溶液

1瓶（10 mL）

组分G：NADP/NADPH裂解缓冲液

1瓶（10 mL）

方案概要：

准备25 ?L的NADPH标准品和/或待测样品

加入25 ?L的NADPH或NADP提取溶液

在37°C下孵化15分钟

加入25 ?L的NADP或NADPH提取溶液

加入75 ?L的NADP/NADPH工作溶液

在37°C下孵化15分钟至2小时

在激发/发射=540/590 nm（截止=570 nm）监测荧光强度

重要说明：

强烈建议与裂解缓冲液（组分G）一起在37°C下孵化细胞，并使用上清液进行实验。

在实验开始前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个。

库存溶液的准备：

除非另有说明，所有未使用的库存溶液应在制备后分成单次使用的小份，并储存在-20°C。避免反复冻融。

NADPH标准溶液（1 mM）

将200 ?L的PBS缓冲液加入NADPH标准品（组分C）的小瓶中，制成1 mM（1 nmol/?L）的NADPH标准溶液。

工作溶液的准备

将10 mL的NADPH传感器缓冲液（组分B）加入NADP/NADPH循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合，制成NADP/NADPH工作溶液。

注意       这种NADP/NADPH工作溶液足够在96孔板中进行125次测定。

文献参考：

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The combined effect of nitrogen deprivation and overexpression of malic enzyme gene on growth and lipid accumulation in Phaeodactylum tricornutum

Authors: Zhang, Ruihao and Zhu, Baohua and Tu, Changchao and Li, Yun and Zhao, Yan and Pan, Kehou

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