ALPCO 脂联素(大鼠)ELISA试剂盒，高效代谢研究工具

ALPCO-脂联素(大鼠)ELISA试剂盒Rat Adiponectin ELISA：用于大鼠血清和血浆中脂联素的定量测定。

艾美捷脂联素(大鼠)ELISA试剂盒/Rat Adiponectin ELISA（22-ADPRT-E01）检测原理：

这是一种使用两种特异性、高亲和力抗体的夹心测定法。样本中的脂联素与涂覆在微孔板的第一抗体结合。随后，第二特异性抗脂联素抗体依次与固定的脂联素结合。第二抗体被生物素化，并与链霉亲和素-过氧化物酶-酶共轭物混合应用。在最后的底物反应中，混合物的颜色将定量取决于样本中脂联素的水平。

储存条件：

收到试剂盒后，直到有效期之前，请将其存放在2-8°C。

储存寿命：

各组分初次开启后的保质期为4周，未使用的条带和微孔板应与干燥剂一起密封存放在夹锁袋中，存放在2-8°C，使用时请按照提供的框架操作。重组的标准品A-F和对照血清KS1与KS2必须存放在-20°C（最长4周）。注意：标准品只能解冻一次——如有必要，请分装在适当的体积中存放。再次使用时，请快速但温和地解冻（避免温度升高超过室温，避免过度漩涡混合）。避免反复冻融。1:20稀释的洗涤缓冲液WP在2-8°C下稳定，可存放长达4周。

试剂准备：

使用前将所有试剂平衡至室温（20 - 25°C）。缓冲液中可能的沉淀物在使用前必须通过混合和/或加热溶解。不能混合不同批号的试剂。

重组：

标准品A-F和对照KS1与KS2用稀释缓冲液VP重组。建议将重组后的试剂在室温下放置15分钟，然后用漩涡混合器彻底但温和地混合（不应产生泡沫）。

稀释：

重组后，将对照血清KS1和KS2用稀释缓冲液VP以与样本相同的比例（1:1500）稀释。

所需体积的洗涤缓冲液WP是通过将提供的20倍浓缩液与去离子水以1:20稀释得到的。

测定程序：

进行测定时，标准品A-F、对照血清KS1和KS2以及样本应尽快（例如<15分钟）移液。为了减少由于孵化时间差异导致的变异性，抗体-POD共轭物AK以及随后的底物溶液S应与样本以相同的顺序和时间间隔添加到板上。停止溶液SL应与底物溶液S以相同的顺序添加到板上。所有测定（标准品A-F、对照血清KS1和KS2以及样本）应以双份进行。为了获得最佳结果，建议准确移液并遵守协议。

孵化：

室温孵化意味着在20 - 25°C下孵化。底物溶液S稳定的四甲基联苯胺是光敏性的；存储和孵化时应避光。

摇晃：

推荐的板振荡器摇晃速率为350转每分钟。然而，可能需要根据使用的板振荡器型号进行调整。摇晃不足可能导致溶液混合不充分，从而导致光密度低、变异性高和/或假值，摇晃过度可能导致光密度高和/或假值。

洗涤：

正确的洗涤对于测试的安全性、可靠性和精确性至关重要。

不完全洗涤是常见的，并且会对测定结果产生不利影响。不当的洗涤技术会增加变异性，例如空白值高，可能导致错误结果。

高背景值或高变异性可能表明洗涤问题。

所有洗涤必须使用提供的稀释至使用浓度的洗涤缓冲液WP进行。每个洗涤周期和孔的洗涤体积至少为300 ?L。

建议手动洗涤。洗涤缓冲液可以通过多步设备、多通道移液管或喷雾瓶分配。液体可以通过在水槽上方动态摆动微孔板来移除。如果使用抽吸设备，必须注意不要划伤孔内表面。在每个洗涤步骤之后，应通过倒置板并在无尘吸水纸上反复拍打以去除剩余液体。

当使用自动微孔板洗涤器时，必须仔细遵循使用说明。必须进行设备调整，例如板几何形状和提供的洗涤参数。分配和抽吸管路不得划伤孔内表面。必须采取措施，使每次抽吸步骤后剩余的液体量最小化。在每个洗涤周期的最后一次抽吸步骤之后，可以通过倒置板并在无尘吸水纸上反复拍打来控制，可能的剩余液体可以被去除。

必须考虑处理潜在感染材料的危险。

典型标准曲线示例：

图1中的示例数据和标准曲线不能用于计算测试结果。每次测试都应生成一个标准曲线。

表1描述了一个典型的标准曲线数据。

文献参考：

1. Nakano, Y., et al., Isolation and characterization of GBP28, a novel gelatinbinding protein purified from human plasma. J Biochem (Tokyo), 1996. 120(4): p. 803-12.

2. Pajvani, U.B., et al., Structure-function studies of the adipocyte-secreted hormone Acrp30/adiponectin. Implications for metabolic regulation and bioactivity. J Biol Chem, 2003. 278(11): p. 9073-85.

3. Tsao, T.S., et al., Role of disulfide bonds in Acrp30/adiponectin structure and signaling specificity. Different oligomers activate different signal transduction pathways.J Biol Chem, 2003. 278(50): p. 50810-7.

4. Shimada, K., T. Miyazaki, and H. Daida, Adiponectin and atherosclerotic disease.Clin Chim Acta, 2004. 344(1-2): p. 1-12.