癌症检测技术大牛Alex Rolland访谈

当借助医学检测来检查我们的健康状况时，我们可能得不到一个准确的答案。 

医学检测中所用的各种指标很难说清楚我们当时到底是健康还是不健康。   

幸运的是，世界各地的科研人员正努力为癌症患者的健康状况提供更准确的答案。  

癌症基因检测技术大牛 Alex Rolland （Cancer Treatment Options and Management Inc. 和 Liquid Biopsy Labs 的联合创始人兼首席科学家） 和他的团队专攻解答肿瘤治疗的检测技术问题。例如：这种癌症治疗的效果如何？病人是否处于缓解期？等等。  

请阅读下面 Alex Rolland 的成功故事，他们团队的研究成果为改善癌症治疗方案并为癌症治疗的未来带来了新希望。   

为什么我选择 Norgen Biotek 的产品

大家好，我叫 Alex Rolland。 我是 Cancer Treatment Options and Management Inc. (CTOAM) 和 Liquid Biopsy Labs 的联合创始人兼首席科学家。    

我在2019年初首次听说了 Norgen Biotek 。当时我正在为我们的 digital PCR 血液活检实验室寻找可靠的试剂盒来提纯 ct-DNA (circulating tumor DNA，循环肿瘤 DNA) 。在此之前，我们测试了许多不同品牌的试剂盒，但都没有成功。原因是用这些试剂盒提纯出来的外泌体，无法用我们的Taqman-ddPCR  (Taqman荧光微滴数据聚合酶链式反应) 技术检测出来。

我喜欢 Norgen 的试剂盒，因为他们的试剂盒基于离心技术，易于操作。首先，通过Norgen的微型试剂盒（Micro Kit）我们获得了少量 ct-DNA，这些 ct-DNA 可以用我们的 Taqman-ddPCR 检测出来。因此我打电话给Norgen Biotek并与一位高级科学家进行了交谈，他告诉我 Norgen 正在研究一种使用两个不同尺寸色谱柱的新方案，并问我愿不愿意试一试。     

我想试一试。因为Norgen 是唯一一家能给我们带来预期结果的公司。不仅如此，另一个让我们一直在使用Norgen试剂盒的原因是：某家大公司的 ct-DNA 保存管只能让我们从两个试管中获得 2-4 mL 的血浆/血清，但是Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存管 (Cat. 63950) 让我们能够从 2 个试管中获得多达 7-10 mL 的血浆/血清。结果令人惊叹！这大大增加了我们可分离血浆/血清的体积，让我们能够顺利完成接下来的测试。  

我们随后测试了 Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化中型试剂盒 (Cat. 55600) 和血浆/血清外泌体纯化和 RNA 分离中型试剂盒 (Cat. 58500), 两者的测试结果都非常好。简单来说，这项测试是从携带突变癌症基因的癌症患者身上采集的血液，使用 Norgen 中型试剂盒监测他们的治疗反应。重要的是当我们使用Norgen的试剂盒进行监测时，我们只希望寻找与活跃的肿瘤细胞相关的 ct-DNA (即从外泌体/外泌体附着等释放的DNA), 并且希望排除来自细胞凋亡或细胞死亡的 DNA。    

我们发现活跃的肿瘤细胞相关的 ct-DNA 主要对应着 146 bp及以下的 DNA 片段，但是超过146 bp的DNA片段通常与垂死的肿瘤/细胞凋亡/细胞裂解有关。Norgen的提取试剂盒专注于 ct-DNA 的小片段DNA，让我们能够专注于活跃肿瘤细胞的 ct-DNA，这一点对癌症检测来说非常重要。  

总结一下我们所认为 Norgen 产品的优势：

(1) Norgen的采血管可以提供更多体积的血浆/血清。

(2) Norgen的试剂盒可以提取更高产量的活跃肿瘤细胞的外泌体 ct-DNA。  

我们得到的ct-DNA结果案例：

迄今为止，我们已经创建了 100 多种定制 TaqMan 探针，通过癌基因突变、抑癌基因和意义不明的变异 (即VUS) 中的突变来监测癌症患者。 

案例一：

在 PRKDC（肿瘤抑制基因）中携带 VUS 的 CRC 患者。我们在患者的肿瘤 DNA 测序结果中发现了VUS，通过进行计算机分析和序列保守分析，表明这种特异的VUS很可能是致病的。事实上，我们随后用该VUS来检测该患者的早期复发和治疗的效果。    

图 1：从患者全血中获得的 PRKDC A358T 外泌体 DNA 的量。 误差线表示 95% 的置信区间 (CI) 

案例二：

该患者患有晚期乳腺癌，我们的测序结果鉴定出了 PIK3CA 突变。 在治疗过程中，医生为患者使用了Alpelisib（一种用于治疗特定类型乳腺癌的药物）。我们通过ct-DNA监测了患者的反应，在使用Alpelisib治疗之前，患者全血内的外泌体含量很高 (May 27/20)。通过Alpelisid的治疗之后，患者的外泌体量有了极大的减少 (Aug. 05/20)。 不幸的是，案例中的患者只能在短时间内忍受这种药物，之后不得不停药。如图所示，在停药治疗以后 (Sept. 13/20)  ct-DNA立刻增加。这表明患者全血中的外泌体量可以用于监测治疗效果。   

图 2：从患者的全血中获得 PIK3CA P1047L 外泌体 DNA, 误差线表示 95% 的置信区间 (CI) 

案例三:

在这个案例中，一名肺癌女性患者被认为在接受免疫治疗时病情有所恶化。 患者的医生告诉她由于肿瘤细胞数量的增加他们将停止她的免疫治疗，她别无选择。然而，如果仅仅通过放射成像的肿瘤检测技术，大约 30% 的免疫治疗患者会出现假性进展，因为肿瘤内免疫细胞的快速增加会导致可见肿瘤的变大和肿瘤细胞数量的增加。这种情况并不能依靠传统的成像诊断（CT、MRI等）检测出来。因为即使这些肿瘤是坏死的 (由于免疫细胞的SUV增加), 在 PET-CT 上这些肿瘤细胞的成像信号还是很强。 但是通过使用 ct-DNA 来进行诊断，我们能够向肿瘤学家证明该患者确实正在经历假性进展，患者应该继续接受治疗，并继续从治疗中获益。 在这个案例中，我们可以看出，基于ct-DNA的诊断结论与成像诊断结论相反。    

图3：从患者全血中获得的KRAS G12D外泌体DNA的数量，误差线表示95%的置信区间（CI）   

案例四：

在这个案例中，患者化疗效果不错。但在后续的免疫治疗中，ct-DNA显示出明显的增加，表明免疫治疗没有效果。这一实时数据使医生能够及时调整治疗计划。   

图4：从患者全血中获得的KRAS G12D外泌体DNA的数量，误差线表示95%的置信区间（CI） 

Norgen Biotek 的帮助：从血样采集，到生物分子提纯，到高通量测序

最近，Norgen与我们一起进行基于RNA seq的基因表达研究。通过分离血液的外泌体并且提纯外泌体RNA，我们可以获得高浓度的RNA来进行我们独特的外泌体RNA癌症基因表达研究。RNA 基因表达研究发现，我们能够从缓解期和复发期癌症患者的肿瘤相关外泌体中获得2万个基因的表达信息。令人兴奋的是，当我们对没有癌症的健康参与者使用这种方法时，我们无法获得足够数量的测序读数！这更加表明了Norgen的外泌体试剂盒是特异性针对于活跃肿瘤细胞的。  

我们的测试结果

通过我们的研究，我们开发了一个只在活跃癌症细胞中存在的转录RNA和基因的检测面板。为了准确起见，我们在一个大型的正常组织面板上进行了大量投资，并使用完全相同的技术来获得正常组织的表达谱。通过比较从肿瘤外泌体RNA获得的RNA表达谱和正常组织谱，我们可以：   

(1) 识别出癌症确诊前的早期癌症活动。  

(2) 识别癌症患者处于缓解期还是早期复发时期。   

(3) 识别癌症患者对治疗是否有反应。  

(4) 识别癌症中 "当前 "驱动基因的全身表达。    

(5) 确定癌症发展的潜在驱动因素 – 例如，如果一个高表达的基因相对于特定的身体组织过度表达，能让我们确定靶向药物的特定组织效益。换句话说，如果基因X在外泌体中相对于正常的肝脏和肺部有过度表达，但相对于正常的骨骼水平却没有，那么这种靶向药物可能对这些器官有益，但对骨骼却无益。   

(6) 这项测试让我们能够确定在肿瘤DNA测序中发现的VUS是否参与了癌症（基于表达水平）。  

对我们团队来说病人是最重要的。我们的肿瘤外泌体研究有可能让那些原本被提供错误治疗、被迫停止有益治疗、或者无法获得迫切需要的癌症治疗药物的癌症患者们获得正确、有效的治疗，延长生存时间，并且提高生活质量。这些检测工具为我们的工作提供了一个关键机制，让我们能够给世界各地的癌症患者带来福音。   

如果没有 Norgen，这一切都不可能实现！

癌症诊断的未来

像 Alex Rolland 和他的团队这样的科学家正在为肿瘤学的研究推波助澜，Norgen Biotek 很荣幸能对此研究过程有所帮助。 通过提供更精确的检测、更准确的治疗，我们希望这项研究能有助于降低癌症相关死亡率。   

感谢 Alex Rolland 和 CTOAM Inc. 团队的奉献精神和辛勤工作。  

了解更多有关Norgen Biotek产品的信息，请点击下面的链接：

• 血浆/血浆无细胞循环DNA纯化中提试剂盒（提取试剂盒）

https://www.amyjet.com/products/NGB-55600.shtml

• 血浆/血浆无细胞循环RNA纯化中提试剂盒（提取试剂盒）

https://www.amyjet.com/products/NGB-58500.shtml

• cf-DNA/cf-RNA保存管 （50）

https://www.amyjet.com/products/NGB-63950.shtml  

作为Norgen Biotek在中国的独家代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供最全面的Norgen Biotek产品，更具价格优势，更高性价比的选择，和更快的到货时间。  

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