Immunochemistry：Caspase-1活性检测试剂盒

程序性细胞死亡 (Programmed cell death, PCD) 是多细胞生物中，由基因调控的细胞自杀过程，常见的PCD包括细胞焦亡(Pyroptosis)、凋亡(Apoptosis)和自噬(Autophagy)。  

今天我们就来聊一聊细胞焦亡(Pyroptosis)。当细胞发生焦亡时，由于细胞膜破裂导致内容物的释放，会激活强烈的炎症反应。细胞焦亡激活的通路包括依赖Caspase-1的经典途径和依赖Caspase-4、5、11的非经典途径。  

依赖Caspase-1的细胞焦亡经典途径：

Caspase-1首先被激活，激活的Caspase-1切割Gasdermin D，生成含氮端活性域的肽段，该结构域结合膜脂并在细胞膜上打孔，导致细胞渗透压的变化，进而发生胀大直至细胞膜破裂。同时，活化的Caspase-1对IL-1β和IL-18的前体进行切割，形成有活性的IL-1β和IL-18，并释放到胞外，募集炎症细胞聚集，扩大炎症反应。  

依赖Caspase-4、5、11的细胞焦亡非经典途径：

通常是细胞质脂多糖（lipopoly-saccharide，LPS）直接激活Caspase-4、Caspase-5和Caspase-11，活化的Caspase-4、5、11切割Gasdermin D产生与Caspase-1相同的裂解作用，从而导致细胞膜穿孔。

细胞焦亡与细胞凋亡相似，与细胞凋亡不同的是，细胞焦亡主要是由caspase-1激活的。因此检测caspase-1活性是细胞焦亡分析的关键。  

美国ICT的用于细胞焦亡分析的Caspase-1检测试剂盒利用FLICA?技术检测Caspase-1活性。这些试剂盒包含caspase-1抑制剂，该抑制剂包含caspase-1的首选结合序列Tyr-Val-Ala-Asp (YVAD)。FLICA试剂FAM-YVAD-FMK（最佳激发波长为488-492 nm，最佳发射波长为515-535 nm），是无细胞毒性的，细胞膜渗透抑制剂。进入细胞，并不可逆地与活化的caspase-1结合。任何未结合的FAM-YVAD-FMK-FLICA试剂扩散出细胞并被冲走。因此留在细胞内的绿色荧光直接体现了活性caspase-1酶活性的。荧光结果可通过荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪进行分析。

* 仅供科研使用，不得用于医疗. 

用阴性对照(非诱导的，A)或5 ng/mL的佛波酯PMA诱导处理的THP-1细胞，使其成为巨噬细胞样细胞(诱导的，B)。48小时后，从诱导种群中去除PMA，用含有10 ng/mL LPS的新鲜培养基替代，诱导caspase-1激活。2小时后，细胞被FAM-YVAD-FMK染色1小时，清洗，并在显微镜下观察。在诱导的样品中，许多细胞呈现亮绿色，表明caspase-1活性水平增加(B，诱导，右)。在非诱导的样品中，很少可见绿色细胞，表明caspase-1活性水平较低(a，非诱导，左)。   

美国ICT除了可提供全面的细胞活性检测相关试剂，包括凋亡、 caspase、 自噬、细胞毒性、坏死等相关检测，还可以同时提供高质量高灵敏度的 ELISA以及相关试剂，包括包被液、封闭液、 冲洗液、 底物、 终止液、 板子等等。 —————————————————————————————————————————— 

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