Cell Biolabs：QuickTiter 慢病毒滴度试剂盒（慢病毒相关HIV p24）

介绍

HIV-1（人类免疫缺陷病毒-1）是一种病毒，属于逆转录病毒家族。它是导致艾滋病的主要病原体之一。HIV-1感染会攻击人体的免疫系统，特别是CD4+ T淋巴细胞，削弱机体对各种感染和疾病的抵抗力。随着疾病的进展，免疫系统逐渐受损，最终导致艾滋病的发展和并发症的出现。 

基于人类免疫缺陷病毒-1（HIV-1）的慢病毒载体已成为基因转移研究中具有潜力的载体。慢病毒载体的优势特点是能够将基因转移和整合到有分裂和无分裂能力的细胞中。假型包膜与溶瘤性口炎病毒包膜G（VSV-G）蛋白结合，扩大了目标细胞范围。已经证明，慢病毒载体能够将基因递送到神经元、淋巴细胞和巨噬细胞等细胞类型，而此前的逆转录病毒载体无法使用。慢病毒载体在体内也被证明能够有效递导脑、肝脏、肌肉和视网膜，而不引起毒性或免疫反应。最近，慢病毒系统被广泛应用于在体外和体内高效地将siRNA整合到各种细胞系和原代细胞中。  

背景

慢病毒颗粒是通过293T细胞的瞬时转染3或4个编码病毒组分的质粒制备的。在48-72小时内收集包装细胞产生的病毒培养基中的病毒颗粒。为了确保假病毒培养基是活性的，并控制每个目标细胞中整合的病毒构建物的拷贝数，需要在进行递导实验之前确定病毒滴度。病毒滴度可以通过对HT-1080或Hela细胞进行递导，然后进行稳定克隆的抗生素筛选来确定。然而，生成可观察的稳定细胞克隆以进行计数和计算滴度结果需要几周的时间。 

HIV p24 ELISA也已被用于测定慢病毒样品的滴度，但它能检测到在瞬时转染过程中由293T细胞产生的慢病毒相关p24和游离p24。因此，总p24水平（慢病毒p24和游离p24）不能用于精确确定慢病毒上清样品中的病毒颗粒。为了精准便捷的进行慢病毒检测，Cell Biolabs研发了QuickTiter?慢病毒滴度试剂盒（慢病毒相关HIV p24），为病毒上清和纯化病毒的快速滴度定量提供了高效的系统。

原理：

Cell Biolabs的QuickTiter?慢病毒滴度试剂盒（慢病毒相关HIV p24）是一种酶免疫测定方法，用于检测和定量慢病毒相关的HIV-1 p24核心蛋白（见下面的测定原理）。在与ViraBind?慢病毒试剂（专利技术）形成复合物时，游离p24保留在上清中，慢病毒相关的p24的数量通过HIV p24 ELISA测量。该试剂盒的检测灵敏度限制为1 ng/mL HIV p24，或约10,000到100,000 TU/mL VSVG假型包膜慢病毒样品。每个试剂盒提供足够的试剂进行高达96次的测定，包括标准曲线和慢病毒样品。

结果示例：

以下图表展示了典型的QuickTiter? 慢病毒滴度试剂盒（慢病毒相关的HIV p24）结果。这些数据仅供参考，不应用于解读实际结果。

图1：HIV p24 ELISA标准曲线

图2：游离p24不与ViraBind?形成复合物。将在培养基中稀释的重组p24与ViraBind?慢病毒试剂处理。通过p24 ELISA测量上清液和沉淀中的p24含量，具体步骤请参考实验步骤。  

图3：GFP慢病毒上清的病毒相关p24滴度。将GFP慢病毒构建物与包装混合物共转染到293LTV细胞中（目录号：LTV-100）。转染后48小时收集培养上清液。HEK293细胞感染GFP慢病毒样品3天后显示GFP表达（A：GFP慢病毒上清液；B：ViraBind?沉淀物）。通过ViraBind?慢病毒试剂分离游离p24和病毒相关p24。p24水平的测定方法请参考实验说明。   

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Cell Biolabs公司位于美国加利福尼亚州南部重要的工业城市圣迭戈（San Diego），是有名的细胞学试剂品牌，作为前沿的细胞学分析检测试剂盒生产商，为生物技术和研究类客户提供最好的基于细胞功能研究以及疾病等方面的高端产品和技术服务。产品主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。全球众多大学、政府研究机构、生物、制药企业的科研实验室均在使用Cell Biolabs的产品。