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Milenia Biotec GmbH：通用侧流式检测条--HybriDetect

发布者：艾美捷科技发布时间：2024-02-01

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一种用于检测生物素和FITC标记的分析物（蛋白质、基因扩增产物）的通用侧流式检测条

REF: MGHD 1

规格：100 Texts

Milenia Biotec GmbH.png

注意：重要更改在边缘处用虚线表示。在说明书的最后，您将找到一张列出引入更改原因的表格。

一、符号解释

二、警告和注意事项

1.所有试剂应在原始容器中存放在2-8℃的环境中。

2.使用前，将所有试剂恢复至室温（18-28 ℃）。

3.必须遵守所有组分的有效期限。

4.保护检测条免受湿气影响；容器必须始终密封。

5.只接触和标记检测条的箔纸覆盖区域（标记区域）。

6.废弃物的处理必须按照当地的法规进行。

7.检测缓冲液含有抗微生物试剂，因此避免与皮肤和/或黏膜接触。

8.适用于专业用户。

三、预期用途

HybriDetect是一种通用的侧流式检测条，用于检测标记有FITC和生物素的分析物（蛋白质、基因扩增产物）。它是一个开发平台。

该测试仅供研究使用，不用于诊断目的。

四、提供的材料、储存和稳定性

组分	货号	规格	准备	储存	保质期
HybriDetect试纸条：膜上涂有生物素配体；金结合的多克隆（兔源）抗FITC抗体	MGDS	2×50次	即开即用	2-8℃ 容器必须始终密封（防潮）！	保质期至到期日
HybriDetect测定缓冲液：三氯乙酸缓冲盐水	MGCB	2瓶每瓶10ml	即开即用	2-8℃	保质期至到期日

可根据要求或从公司网站：www.milenia-biotec.de 获取材料安全数据表（MSDS）。

五、所需材料（不包括在内）

1、移液管

2、移液管尖（含有PCR的保护性过滤器）

3、反应管或96孔微孔板

六、必要的开发工作-开发平台

开发一个含有两种不同标记的探针用于分析物的溶液。

以下条件是必要的：

探针必须标记有：FITC（异硫氰酸荧光素）；生物素

在检测过程中，使用约100微升的液体（样品和特定于分析物的溶液）。

所提供的检测缓冲液（MGCB）可以用作该特定于分析物的溶液的基础缓冲液。

使用示例：

20微升样品和80微升特定于分析物的溶液，孵育时间为5分钟。

注意：

1、体积、特定于分析物的溶液和孵育时间是个体测试开发的一部分。

2、检测基因扩增子的基本步骤在第7页解释：“检测性能PCR产物”。扩增产物应该被生物素化，特异性杂交探针应该标记有FITC。原则上，所有扩增程序（聚合酶链式反应或等温扩增，如LAMP或RPA）都可以使用。

七、方法：

Milenia HybriDetect是一种即用型的通用测试条（侧流式试纸），基于使用金颗粒的侧流技术。该试纸旨在开发用于多种分析物（如蛋白质、抗体或基因扩增产物）的定性或半定量快速测试系统。用户需要开发一种特定于分析物的溶液，其中包含用FITC标记的第一种探针（例如抗体、抗原、特异性探针）和用生物素标记的第二种探针（例如抗体、引物）（请参阅第5页的“常见测试原理”）。

待测样品与开发的特定于分析物的溶液混合后，将试纸浸入溶液中。标记有FITC和生物素的结合分析物首先与试纸的样品应用区域中标记有金的FITC特异性抗体结合。金复合物在毛细作用力的驱动下通过膜传播。只有捕获的分析物金颗粒在通过固定化的生物素配体分子的线时结合，并随时间形成红蓝色带状。

未结合的金颗粒迁移到控制线上，并被物种特异性抗体捕获。随着孵育时间的延长，会形成一条颜色浓烈的控制带。

八、常见测试原理

Control Band Dipstick.png

控制带试纸（Control Band Dipstick）

无论如何，控制带必须可见！

它是一个控制功能，不能用来评估测试带结果的质量。如果孵育期后控制带

不可见，结果无效！必须使用新的试纸重复测试！

九、结果判读

有两种解读Milenia HybriDetect试纸结果的方式：

1）通过目视解读进行定性解读

Milenia HybriDetect.png

2）半定量，例如通过评估卡进行评估

Milenia HybriDetect-1.png

十、PCR产物测定性能

从容器中取出所需数量的试纸条并标记它们。
对于每个要分析的样品，将100uL的HybriDetect测定缓冲液或个别开发的缓冲液移液到反应管或微孔板孔中。
直接将5-10uL的杂交产物移液到样品施加区域，或者选择性地将5-10uL的杂交产物加入反应管/孔的溶液中。
将带有样品施加区域的试纸条放入溶液中，垂直放置，孵育时间为5-15分钟。
孵育结束后，将试纸条从测定溶液中取出，并立即解读测试结果。

Milenia HybriDetect-2.png

注意：

如果需要更高的分析灵敏度，增加PCR产物的体积可能会有所帮助。

体积、特定于分析物的溶液和孵育时间始终是个别测试开发的一部分。

十一、解读“PCR”结果

1.测试带和控制带均呈现明显的红色条带注： 1.1 弱染色的测试带应视为阳性 1.2 阳性结果可能在1-2分钟内可见 1.3 在杂交产物浓度非常高的情况下，控制带的强度可能会降低。然而，控制带仍应清晰可见。	PCR扩增产物已被检测到（阳性）。
2.只有控制带作为红线可见。	未检测到PCR扩增产物（阴性）。

Milenia HybriDetect-3.png

重要提示：为了检查反应的特异性，强烈建议引入PCR阴性对照。

十二、PCR故障排除

问题	可能的原因	建议
控制带不可见。	a) 错误或降解的测定缓冲液 b) 试纸条的过期日期已过 c) 试纸条的存储条件不正确	使用新的（新鲜的）化学试剂
试纸条上呈现阴性结果，但琼脂糖凝胶中的条带清晰可见。	a) 在琼脂糖凝胶中检测到非特异性PCR产物 b) 杂交不成功	通过Southern blotting或序列分析检查PCR产物的身份检查杂交条件。
矿物油	a) 矿物油影响测定的流动特性 b) 可能会阻碍测试带的形成。	非常缓慢地从反应管底部移除PCR产物。

十三、PCR测定的灵敏度

Milenia HybriDetect的分析灵敏度相当于或高达乙溴化乙锭染色琼脂糖凝胶的1,000倍。根据PCR产物的大小和扩增循环的数量，最多可以检测到5 pg的DNA。

十四、文献参考

Kiatpathomchai W, et al, J Virol Methods (2008); 153: 214-217

Puthawibool T, et al, J Virol Methods (2009); 156 (1-2): 27-31

Jaroenram W, et al, Mol Cell Probes (2009); 23 (2): 65-70

Nimitphak T, et al, Mol Cell Probes (2009); 24 (1): 1-5

Kikuchi T, et al, Nematology (2009) ; 99 (12): 1365-1369

Piepenburg O, et al, PloS Biology 2006, Volume 4, Issue 7, e204

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