Fab-ZAP human (IT-51)，助力ADC抗体&双特异性抗体药物研发

ADC药物研发是目前医药领域的热门研究方向之一，ADC（Antibody-drug conjugates）即抗体药物结合物，是一种将抗体与化疗药物结合的新型药物。它利用抗体的特异性靶向肿瘤细胞，将化疗药物精确送达肿瘤细胞内部，从而减少对正常细胞的损害，提高治疗效果。

在ADC药物研发中，抗体药物内化（internalization）是一个至关重要的环节。抗体药物内化指的是抗体与靶向肿瘤细胞表面抗原结合后，通过内吞作用将抗体药物与肿瘤细胞一起内部化。这一过程对于ADC药物的疗效和安全性至关重要。   

艾美捷为您推荐，Fab-ZAP human（#IT-51）是山羊抗人一价抗体和核糖体灭活蛋白saporin的化学偶联物。它使用人一抗来靶向和消除细胞。该二级偶联物被广泛用于评估一抗内化的潜力。

科研与工业，实用案例：

1.Fab-ZAP human（#IT-51）专业的抗体内化工具，助力双特异性抗体研发

我们构建了一种双特异性抗体，称为bsAb CD47xEGFR-IgG1，以EGFR为靶点，阻断了癌细胞表面CD47的表达。bsAb CD47xEGFR-IgG1选择性地诱导吞噬EGFRpos/CD47pos癌细胞，并赋予中性粒细胞杀死这些癌细胞的能力，这是一种破坏靶细胞膜的ADCC的替代形式。  

【具体实验方法】评估bsAb CD47xEGFR-IgG1的内化

EGFRpos/CD47pos NCI-H292细胞与bsAb CD47xEGFR-IgG1或对照bsAb（2 μg/ml）以及抗人Fc saporin-6毒素标记的Fab（Fab-ZAP，IT-51，Advanced Targeting Systems）一起，评估了抗体/抗原复合物的内化。72小时后，利用流式细胞术使用annexinV/PI染色评估了凋亡癌细胞的死亡。通过流式细胞术，使用一系列固体癌细胞类型评估了bsAb CD47xEGFR-IgG1内化EGFR和CD47的能力。简而言之，癌细胞在37°C条件下用bsAb CD47xEGFR-IgG1（1 μg/ml）或适当的对照处理24小时，随后使用抗EGFR mAb 528和抗CD47 mAb 2D3评估残留的EGFR和CD47细胞表面表达。值得注意的是，mAb 528和mAb 2D3分别结合EGFR和CD47上不重叠的表位，不干扰bsAb CD47xEGFR-IgG1对EGFR和/或CD47的结合。

Fig.1 在使用Fab-ZAP (IT-51)时，通过指定的抗体内化EGFR和/或CD47，使用山羊抗人单价抗体和沙门酸菌素的化学结合物，测量NCI-H292细胞的凋亡，在72小时后进行测量。通过流式细胞术使用细胞凋亡素V染色测量凋亡.  

2.Fab-ZAP human（#IT-51）专业的抗体内化工具，助力三优生物ADCs平台

2.1 Fab-zap，检测Sacituzumab抗体被hu-TROP2-HEK293内吞

Fig.2 用Fab-zap试剂和抗体偶联，抗体引导ZAP复合物到达目的细胞，随后与目的细胞结合并内化。ZAP复合物进入细胞质后，连接子（Linker）被酶解，释放Saporin杀伤细胞。抗体复合物和细胞共孵育48 h后，通过检测抗体复合物对细胞的杀伤来计算抗体的内吞率，48 h后，Sacituzumab被hu-TROP2-HEK293内吞比率随抗体的浓度加大而增大，在抗体浓度为0.4 nM时内吞率达到70%。[数据来自，三优生物对外公开数据]  

2.2 Fab-zap，检测Sacituzumab抗体被NCI-H292内吞

Fig.3 抗体复合物和NCI-H29细胞共孵育48 h后，通过检测抗体复合物对细胞的杀伤来计算抗体的内吞率，48 h后，Sacituzumab被NCI-H292细胞内吞比率随抗体的浓度加大而增大，在抗体浓度为0.4 nM时内吞率达到70%。[数据来自，三优生物对外公开数据]  

2.3 Fab-zap，检测99961.1被hu-ROR1-HEK293内吞

Fig.4 抗体复合物和hu-ROR1-HEK293细胞共孵育48 h后，通过检测抗体复合物对细胞的杀伤来计算抗体的内吞率，48 h后，99961.1被hu-ROR1-HEK293细胞内吞比率随抗体的浓度加大而增大，在抗体浓度为0.4 nM时内吞率达到70%。[数据来自，三优生物对外公开数据]  

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