cGAS及cGAS-STING通路:
cGAS-STING信号通路最初是作为天然免疫系统的一个重要组成部分被发现,其功能是检测胞浆DNA的存在,并在反应中触发炎症基因的表达。DNA通常存在于细胞核中,异常在胞浆中定位的DNA与肿瘤的发生或病毒感染有关,环状GMP-AMP合成酶(cyclic GMP-AMP Synthasec,cGAS)感知到本不应出现在细胞质的DNA时,会催化GTP和ATP之间发生化学反应并生成一种被称为环鸟腺苷酸(cvclic GMP-AMP cGAMP)的小分子,该小分子作为先天免疫系统的信使,会进一步激活免疫反应。因比,cGAS就像一个防盗报警器,cGAMP则是防盗报警器产生的电信号。cGAMP结合并激活STING,后者是一种作为细胞对异常胞浆DNA作出免疫应答的关键组分的跨膜接头蛋白,STING被激活后随TBK1从内质网一起转位至核周内体。TBK1激酶磷酸化并激活干扰素调节因子(IRFs)和NF-KB,后者诱导Ⅰ型干扰素和其他免疫应答基因。
2013年发现cGAS后不久,自我DNA的异常激活被证明是导致衰弱甚至致命的自身免疫性疾病的基础,如系统性红斑狼疮(SLE)和Aicardi–Goutieres综合征(AGS)。动物模型中的敲除研究清楚地表明,抑制cGAS是一种有希望的治疗干预方法,使得cGAS成为近些年热门的先天免疫靶点的酶。这里给大家带来全球领先先导药物高通量筛选专家BellBrook研发的cGAS抑制剂高通量筛选工具——Transcreener cGAMP cGAS检测试剂盒,可助力全球制药和生物技术公司、CRO和学术实验室加速药物发现。
Transcreener cGAMP cGAS检测法通过测定生成的cGAMP来测定cGAS酶的活性。通过检测cGAMP输出,该方法提供了一种实时评估任何cGAMP产生酶活性的通用方法。Transcreener cGAMP检测技术使用了一种简单但高效的方法,包括cGAMP特异性抗体搭配远红荧光的示踪剂。反应中产生的cGAMP与示踪剂竞争,改变荧光特性并提供荧光读出。cGAS分析可用于荧光偏振(FP)和时间分辨-荧光共振能量转移(TR-FRET)两种方式进行检测~
荧光偏振(FP)法原理示意图 |
时间分辨-荧光共振能量转移(TR-FRET)法示意图 |
参考用途:
cGAS酶活性检测
筛选cGAS抑制剂化合物库
量化抑制剂效力
确定cGAS-抑制剂滞留时间
相关实验验证数据请参见:Targeting the cGAS-STING Pathway Using a Homogenous, HTS Compatible Transcreener? cGAS Assay
Transcreener cGAMP cGAS试剂盒优势:
操作简便,高通量,兼容96, 384和1536孔模式~ |
出色的信号稳定性:24小时以上的信号依旧稳定性 |
产品性能展示:
cGAS由双链DNA激活,需要ATP和GTP底物来生产cGAMP | cGAS和 cGAMP 线性 |
第一步轻松高通量筛选处化合物库 | 后续通过剂量反应确定抑制剂效力 |
cGAS被dsDNA激活 | ATP和GTP依赖 |
Transcreener cGAMP cGAS试剂盒组分:
组分 | 描述 |
cGAMP Antibody | 二核苷酸cGAMP特异的抗体。 |
Tracer | 荧光的变化可以在FP或TR-FRET中读取 |
Stop & Detect Buffer B, 10X | 一种可以用来终止酶反应的缓冲液,用于终点法读数 |
ATP | ATP可用于酶反应和标准曲线 |
GTP | GTP可用于酶反应和标准曲线 |
cGAMP | 标准品 |
Interferon Stimulatory DNA | ISD是一种45-bp的低聚物,用于激活cGAS酶 |
需要自备的试剂及仪器:
名称 | 描述 |
cGAS酶 | cGAS(Cat# 2227)可以从艾美捷购买。 |
酶缓冲液 | 我们通常使用含有20 mM TRIS (pH 7.5), 5 mM MgCl2, 0.01% Brij-35和1% DMSO(测试化合物的溶剂)的酶缓冲液,使用最适合你的酶条件的缓冲液。 |
检测用板子 | FP 格式:黑色板子,推荐康宁384孔板(Cat# 4514) TR-FRET格式:白色板子,推荐康宁384孔板(Cat #4513) 均可从艾美捷购买~ |
读板器 | 需要能检测荧光偏振或者TR-FRET的读板器 |
移液器 | 使用液体处理设备,可以精确分配亚微升体积到384孔板。 |
超纯水 | 一些去离子水系统被核酸酶污染,核酸酶可以降解核苷酸底物和产物,降低了检测性能。小心处理和使用超纯水可以消除这个潜在的问题 |
相关产品推荐:
类别 | 货号 | 名称 | 规格 |
荧光偏振法的试剂盒 | 3024-1K | Transcreener cGAMP cGAS FP Assay (1,000 Assay, 384 Well) | 1000 Assay |
3024-10K | Transcreener cGAMP cGAS FP Assay (10,000 Assay, 384 Well) | 10000 Assay | |
3024-100K | Transcreener cGAMP cGAS FP Assay (10 X 10,000 Assay, 384 Well) | 10X10000 Assay | |
TR-FRET法的试剂盒 | 3025-1K | Transcreener cGAMP cGAS TR-FRET Assay (1,000 Assay, 384 Well) | 1000 Assay |
3025-10K | Transcreener cGAMP cGAS TR-FRET Assay (10,000 Assay, 384 Well) | 10000 Assay | |
3025-100K | Transcreener cGAMP cGAS TR-FRET Assay (10 X 10,000 Assay, 384 Well) | 10X10000 Assay | |
cGAS酶 | 2227 | Recombinant cGAS Enzyme, Active, Human, Full-Length, 10 ?g | 10 ?g |
2228 | Recombinant cGAS Enzyme, Active, Human,?Full-Length,?100 ?g | 100 ?g | |
cGAS酶+试剂盒 | 3024-1K-B | Includes Transcreener cGAS FP Assay 1K Kit and 20 ?g Human cGAS Enzyme | 1000 Assay+20 ?g |
3024-10K-B | Includes Transcreener cGAS FP Assay 10K Kit and 200 ?g Human cGAS Enzyme | 10000 assay+200 ?g | |
3025-1K-B | Includes Transcreener cGAS TR-FRET Assay 1K Kit and 20 ?g Human cGAS Enzyme | 1000 Assay+20 ?g | |
3025-10K-B | Includes Transcreener cGAS TR-FRET Assay 10K Kit and 200 ?g Human cGAS Enzyme | 10000 assay+200 ?g | |
3024-1K-B | Includes Transcreener cGAS FP Assay 1K Kit and 20 ?g Human cGAS Enzyme | 1000 Assay+20 ?g | |
黑色板子 | 2233 | Corning 96-Well Black Assay Plates (#3686), 3-Pack (200+ Assays) | 3-Pack |
2229 | Corning 384-Well Black Assay Plates (#4514), 3-Pack (1,000+ Assays) | 3-Pack | |
2230 | Corning 384-Well Black Assay Plates (#4514), 30-Pack (10,000+ Assays) | 30-Pack | |
白色板子 | 2234 | Corning 96-Well White Assay Plates (#3642), 3-Pack (200+ Assays) | 3-Pack |
2231 | Corning 384-Well White Assay Plates (#4513), 3-Pack (1,000+ Assays) | 3-Pack | |
2232 | Corning 384-Well White Assay Plates (#4513), 30-Pack (10,000+ Assays) | 30-Pack |
Note:以上产品仅用于科研,不能用于医疗及诊断~
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