Biogradetech：Calcein-AM/PI，活细胞/死细胞双染试剂盒

Calcein-AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，Calcein-AM由于在Calcein的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂(如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate)相比，Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低。Calcein的激发和发射波长分别为490nm和515nm。   

Calcein,AM仅对活细胞染色。作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜，它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发：488,545nm，发射：617nm)，因此PI仅对死细胞染色。  

由于Calcein和PI-DNA都可被490nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545nm激发，仅可观察到死细胞。根据以上特点，Calcein AM和PI经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。   

今天就给大家带来一款基于Calcein AM和PI的活死细胞双染试剂盒(B-CHK103)，本染色方法适用于荧光显微镜、荧光酶标仪等微孔板荧光扫描设备、流式细胞仪或其他的荧光设备。本染色方法适用于大多数真核细胞，包括贴壁细胞和某些组织样本，但不包括细菌和酵母样本。   

需要注意的是Calcein AM/PI双染有效染色的前提是相应的细胞模型的活力变化是指酶活性变化和质膜完整性变化这些物理和生化特性，不影响这些细胞特性的细胞毒性事件可能不能使用此方法进行准确评估。 

不同检测平台的建议步骤：

荧光显微镜检测：

• 准备样本细胞。

• 用PBS洗涤细胞2～3次。

• 用100～150μL染色工作液A至盖玻片将细胞样品覆盖(或重悬)。

• 在室温或37℃避光孵育20～45分钟。

• 用PBS洗涤细胞。

• 用100～150μL染色工作液B至盖玻片将细胞覆盖(或重悬)。

• 在室温或37℃避光孵育10～45分钟。

• 用PBS洗涤细胞。

• 用荧光显微镜检测结果。最大激发为490nm，最大发射波长分别为515nm和617nm。

流式细胞仪检测：

• 收集细胞：可以用胰酶-EDTA等消化细胞，制备成细胞悬液。

• 用PBS洗涤细胞两次。

• 制备1mL细胞悬浮液，浓度为0.1至5×10⁶细胞/mL。细胞可以在无血清培养基或其他缓冲液中重悬。

• 在细胞中加入适量Calcein-AM溶液和适量PI母液，混匀。

• 在室温或37℃避光孵育15～30分钟。

• 尽快用流式细胞仪检测结果。

荧光酶标仪检测：

• 在微孔板中准备细胞样本孔以及对照孔。

• 用PBS洗涤细胞2～3次。

• 加入200μL染色工作液。

• 在室温或37℃避光孵育15～45分钟.

• 用PBS洗涤细胞。

• 加入适量PBS。

• 用荧光酶标仪/荧光光度计检测结果。最大激发波为490nm，最大发射波长为525nm和617nm。

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