ATSbio：抗体药物(ADC)内化体外检测新工具-pHast

过去十年来，生物制剂越来越多地被用作治疗药物。对于抗体药物偶联物(Antibody-Drug Conjugates，ADC)，抗体的内化是一种强有力的作用机制，可以使ADC从靶细胞质膜上的结合位点转移至溶酶体的裂解环境内，从而激活与其相连的毒素。   

内化过程的效率与ADC的治疗指数直接相关，，提供便捷高效且易于使用的研究内化的抗体标记工具。   

上期我们介绍了基于生物毒素皂草素(ZAP)二级偶联物的抗体内化检测方案：抗体内化，抗体药物筛选经典方案（中文操作指南） 

今天我们给大家带来一款基于荧光报告探针的抗体内化检测工具——pHast(替代pHrodo技术)，pHast偶联物是定量检测抗体的特异性、结合情况和内化水平的最快工具之一，可在1天内获得结果，pHast是一种pH依赖性荧光报告探针，这种荧光报告探针在胞外中性pH下几乎无荧光，一旦内化进入细胞后可发出明亮的荧光。pHast于二抗形成pHast偶联物，可以很方便的检测抗体的内化水平。  

pHast偶联物检测原理及应用示例：

         我们可以提供不同种属来源，完整IgG以及Fab片段的pHast缀合物：   

  除了抗体pHast偶联物，同时我们还可以提供链霉亲和素pHast偶联物（PH-03）,链霉亲和素pHast与生物素化蛋白结合，通过pH依赖性荧光报告探针（pHast）来检测药物内化水平：

       引文赏析：

       Shramm PA, Ancheta L (2019) Streptavidin-pHast: A readily conjugatable, pH-sensitive dye to screen for internalization. Cancer Res 79(13 Suppl):2177. Proceedings of the American Association for Cancer Research Annual Meeting, Atlanta GA.

       Kinneer K, Meekin J, Tiberghien AC, Tai YT, Phipps S, Kiefer CM, Rebelatto MC, Dimasi N, Moriarty A, Papadopoulos KP, Sridhar S, Gregson SJ, Wick MJ, Masterson L, Anderson KC, Herbst R, Howard PW, Tice DA (2018) SLC46A3 as a potential predictive biomarker for antibody-drug conjugates bearing noncleavable linked maytansinoid and pyrrolobenzodiazepine warheads. Clin Cancer Res 24(24):6570-6582. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-18-1300

       Shramm PA, Ancheta L, Higgins D, Lappi DA (2017) A rapid, pH-sensitive screening method to detect internalization of cell surface markers for development of antibody-based pharmaceuticals to treat brain tumors. Neuroscience 2017 Abstracts 566.24 / H7. Society for Neuroscience, Washington, DC.

       Ancheta L, Shramm PA, Lappi DA (2017) Method for screening neuronal tumor cell surface markers for high specificity and rapid internalization as potential oncologic treatments. Neuroscience 2017 Abstracts 612.11 / SS46. Society for Neuroscience, Washington, DC.