Lifesensors：UbiTest琼脂糖-TUBE洗脱试剂盒

背景：

泛素是一种小的多肽，可以通过其C-末端与靶蛋白上赖氨酸残基的胺基团结合。这种结合称为单泛素化。额外的泛素基团可以通过七个存在于泛素中的赖氨酸残基（K6、K11、K27、K29、K33、K48和K63）之一与初始泛素结合。当泛素附加到第二个泛素的N-末端时，形成的链被称为Met1-连接（M1）链或“线性”链。这些泛素链的形成被称为多泛素化。其中两种极为典型的形式是K48和K63多泛素化。多泛素化的极为主要结果是靶蛋白通过蛋白酶体介导的降解。多泛素化是一个可逆的过程，因为这些链可以被称为去泛素化酶（DUBs）的蛋白酶降解和/或去除。这种信号的动态性质是难以隔离和功能表征多泛素化蛋白质的主要障碍。因此，许多蛋白质的泛素化状态是未知或了解有限的。

确定目标蛋白上的多泛素链连接方式是具有挑战性的。传统的方法要么是通过质谱分析，要么是通过使用特异性连接抗体进行免疫印迹，这些方法都比较繁琐。为了更为明确的证明蛋白质的泛素化连接方式，LifeSensors开发研究推出了琼脂糖-TUBE洗脱试剂盒，利用这个试剂盒，可以在免疫印迹分析之前，将多泛素化蛋白质的免疫沉淀与特异性连接去泛素化酶消化耦合。在K48/K63特异性DUB处理后，未修饰底物的信号增加或高分子量多泛素化底物的信号减弱，清晰地表明蛋白质经历了K48/K63泛素化。

琼脂糖-TUBE洗脱试剂盒，使用了能够结合所有泛素链连接的TUBEs。TUBEs是工程化的串联UBA，与四泛素结合的解离常数在纳摩尔范围内，已经证明TUBEs还可以保护蛋白质免受去泛素化和蛋白酶体介导的降解的影响，即使在通常需要抑制这些活性的抑制剂缺失的情况下。TUBEs对多泛素化蛋白质的纳摩尔亲和力使得从细胞系和组织中高效地分离和表征这些蛋白质成为可能。已经证明TUBE1能够结合所有8种连接类型。TUBEs的出色特性使其能够高效地检测多泛素化蛋白质的天然状态，而TUBEs的多功能性则满足了广泛的实验需求。琼脂糖-TUBEs是将TUBE结构直接耦合到琼脂糖珠上，用于通过免疫印迹和/或下游蛋白质组学研究来鉴定和表征多泛素化蛋白质。琼脂糖-TUBEs能够方便地进行“一步式”下拉（pull-down）多泛素化蛋白质的操作。

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应用领域

1. 从细胞和组织提取物中方便地一步式下拉（pull down）多泛素化蛋白质

2. 分离泛素化蛋白质以进行蛋白质组学研究

3. 确认目标蛋白质的泛素化连接方式

优势

? 与单个UBA相比，对多泛素链的亲和力高出1000倍

? 避免过度表达表位标记的泛素用于下拉实验

? 明确确定目标蛋白质的泛素化状态

? 可以在单个样品中多重复合，检测多个不同的目标

结果分析

 对Jurkat细胞中的蛋白质进行泛素化连接分析。

（A）广谱DUB处理后MDM2信号增加，表明MDM2被多泛素化。在K48特异性DUB处理后，免疫印迹中MDM2信号增加，表明MDM2被K48泛素化。MDM2信号在免疫印迹中较高，是因为DUB未水解目标蛋白质上的近端Ub，或者存在与K48链不同的多泛素链连接。

（B）广谱DUB处理后未修饰的TNFR1信号增加，表明TNFR1被多泛素化。在K63特异性DUB处理后，高分子量泛素化的TNFR1信号减少，未修饰的TNFR1信号增加，表明TNFR1被K63泛素化。

LifeSensors成立于1996年，位于美国宾夕法尼亚州费城，是一家为药物发现与研究提供方法和可行性技术方法的生物技术公司，目前主要的产品有400多种，其产品主要覆盖泛素和泛素蛋白酶体通路等科学应用领域，并且公司拥有两大独家技术平台：用于细胞信号和药物发现的泛素蛋白酶体系统(UPS)，以及增强目的蛋白在大肠杆菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞中表达与纯化的SUMO融合表达系统，此外，LifeSensors还为泛素的蛋白质组学提供众多定制技术服务，并且已经开发了各种各样的测定细胞中的生理底物或生物标志物的方法。

艾美捷作为LifeSensors在中国的区域独家代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的LifeSensors的产品。

传统方法繁琐，而我们的试剂盒结合TUBEs技术，清晰展示蛋白质的泛素化状态。TUBEs高效结合各种泛素链，确保准确分离和鉴定多泛素化蛋白质，满足广泛实验需求。

琼脂糖-TUBEs直接耦合TUBE结构，简便进行“一步式”下拉多泛素化蛋白质实验。适用于细胞和组织提取物，帮助分离泛素化蛋白质进行蛋白质组学研究，确认目标蛋白质的泛素化连接方式。

产品优势：

对多泛素链的亲和力高出1000倍

避免过度表达标记泛素

明确确定目标蛋白质的泛素化状态

单个样品多重复合，检测多个目标

立即体验琼脂糖-TUBEs，探索泛素化世界的奥秘！ #泛素化 #蛋白质组学 #科研利器