欢迎您访问武汉艾美捷科技有限公司官方网站!
站点地图 服务热线:400-6800-868
  • 产品
  • 文章

AGENT BRAND

品牌专题

当前位置:首页 > 品牌专题

Montana Molecular:Green Up cADDis cAMP生物传感器

发布者:艾美捷科技    发布时间:2024-08-23     
分享到:

G蛋白偶联受体(GPCR)是体内最大的信号受体家族,参与几乎所有的生理过程,并且是重要的药物靶点。由于GPCR信号传导的复杂性,在某些具体通路过程中的调控机理仍然存在争议,为此科学家们开展了进一步的研究。

1.GPCR信号传导的复杂性传统观点认为,GPCR的信号传导主要发生在质膜上。然而,近年来越来越多的证据表明,许多GPCR在内化后仍能继续与G蛋白结合,从而在内体上启动信号传导。

2.内体cAMP信号传导的争议对于许多GPCR,内体cAMP信号传导被认为是β-抑制蛋白(β-arrestin)依赖的,因为β-arrestin对于受体的内化和内体上信号的维持至关重要。然而,关于是否存在不依赖于β-arrestin的内体cAMP信号传导存在争议。

3.VIPR1受体的特殊性血管活性肠肽受体1(VIPR1)是一种多肽激素受体,已知与β-arrestin结合,但其内化是否依赖β-arrestin尚不清楚。

 

Emily等人就cAMP信号传导是否依赖β-抑制蛋白(β-arrestin)发布表了在线研究《β-Arrestin-independent endosomal cAMP signaling by a polypeptide hormone GPCR》

β-arrestin.png

研究方法

1. 细胞系和质粒构建

使用HEK293细胞系,通过CRISPR技术构建β-arrestin双敲除(β-arr DKO)细胞系,以研究β-arrestin在VIPR1内化及信号传导中的作用。

构建表达HaloTag-VIPR1、β-arr2-mApple等融合蛋白的质粒,用于细胞成像和流式细胞术分析。

2. cAMP信号检测

使用Montana Molecular品牌的Green Up cADDis cAMP生物传感器实时检测细胞内cAMP水平。该传感器基于FRET原理,能够高灵敏度地监测cAMP的动态变化。

在实验中,通过VIP刺激细胞,观察cAMP水平的瞬时变化,并比较野生型与β-arr DKO细胞系之间的差异。

3. 内吞和信号传导分析

通过流式细胞术和共聚焦显微镜观察VIPR1的内化过程;使用NanoBiT蛋白互补系统检测β-arrestin与VIPR1在内体和质膜上的结合情况; 通过阻断内吞途径或使用GRK抑制剂,进一步分析内吞和磷酸化对VIPR1信号传导的影响。


实验结果

1. VIPR1的内化不依赖β-arrestin

在β-arr DKO细胞中,VIP仍能诱导VIPR1的内化,且内化动力学与野生型细胞相似;使用流式细胞术和共聚焦显微镜观察到,VIP刺激后VIPR1从质膜转移到内体。

2. 内体cAMP信号传导不依赖β-arrestin

在β-arr DKO细胞中,VIP刺激仍能引发内体上的cAMP信号传导,尽管信号强度较野生型细胞减弱;NanoBiT实验表明,VIP刺激后,β-arr2能被招募到内体和质膜上的VIPR1,但在β-arr DKO细胞中,内体上的信号传导不受影响。

3. β-arrestin在信号传导中的新角色

通过比较野生型与β-arr DKO细胞的cAMP信号曲线,发现β-arrestin的主要作用是调节质膜和内体信号传导的时空分布;β-arrestin通过与质膜上的VIPR1结合,加速质膜信号传导的脱敏,从而使内体信号传导以第二个峰值的形式出现。

4. GRK磷酸化对内吞和信号传导的影响

使用GRK抑制剂Cmpd101发现,VIPR1在质膜上与β-arrestin的结合不依赖于GRK磷酸化,但在内体上则需要GRK磷酸化。这表明质膜和内体上的VIPR1-β-arrestin复合物具有不同的生化特性。


结论

1. 内体cAMP信号传导的新模式

VIPR1是首个被证实能在不依赖β-arrestin的情况下在内体上产生cAMP信号传导的GPC;这一发现挑战了传统的β-arrestin依赖模型,并提出了内体信号传导的新模式。

2. β-arrestin在信号传导中的新功能

β-arrestin不仅作为内吞适配蛋白和信号分子,还通过调节质膜和内体信号传导的时空分布来精细调控GPCR的信号输出;β-arrestin在质膜上形成信号衰减复合物,加速质膜信号传导的脱敏;而在内体上则形成信号中性复合物,不影响内体信号传导。

3. 对GPCR信号传导复杂性的新认识


本研究表明,GPCR信号传导的复杂性远超预期,不同GPCR在内吞和信号传导方面存在显著差异; 对VIPR1的研究为理解GPCR信号传导的多样性和复杂性提供了新的视角和方法。


在本研究中,Montana Molecular品牌的Green Up cADDis cAMP生物传感器Cat#U0200G在GPCR信号传导分析中发挥了关键作用,具体体现在以下几个方面:

1. 高灵敏度实时监测

Green Up cADDis cAMP生物传感器(Cat#U0200G)基于FRET原理,能够实时监测细胞内cAMP水平的微小变化。在本研究中,该传感器成功捕捉到了VIP刺激下cAMP水平的瞬时变化,为分析VIPR1信号传导提供了关键数据。

2. 适用于多种细胞系和实验条件

该传感器适用于多种细胞系,包括HEK293细胞等常用模式细胞。同时,它也适用于不同的实验条件,如药物刺激、基因敲除等。

3. 推动GPCR信号传导研究的发展

通过实时监测cAMP水平,Green Up cADDis cAMP生物传感器(Cat#U0200G)为GPCR信号传导的研究提供了强有力的工具。它不仅有助于揭示GPCR信号传导的分子机制,还有助于发现新的药物靶点和治疗策略。

 

综上所述,本研究通过深入分析VIPR1的内化和信号传导机制,揭示了GPCR信号传导的复杂性和多样性。同时,Green Up cADDis cAMP生物传感器(Cat#U0200G)在本研究中发挥了重要作用,为揭示VIPR1信号传导的动态过程提供了关键数据。这些发现不仅丰富了我们对GPCR信号传导机制的认识,还为未来药物研发提供了新的思路和方法。



相关文章
  • 高品质保障 成熟的生产研发技术
  • 高性价比 价宜质优,性价比高
  • 高效省心 从购买到使用,放心无忧
  • 安全运输 完善的保护措施安全运输

微信扫码在线客服

微信咨询

全国免费技术支持

400-6800-868

在线客服