LifeSensors：TUBEs，泛素化蛋白富集纯化

背景

泛素是一种小的多肽，可以通过其C-末端与目标蛋白质上的赖氨酸残基的胺基团结合。这种结合被称为单泛素化。额外的泛素结构可以通过泛素中存在的七个赖氨酸残基之一与初始泛素结合。这些泛素链的形成被称为多泛素化。泛素化是一种常见的调节蛋白的稳定性和功能的翻译后修饰。

蛋白的泛素化需要3种酶的参与，分别是泛素活化酶（ubiquitin-activating enzyme，E1）、泛素偶联酶（ubiquitin conjugation enzyme，E2）和泛素连接酶（ubiquitin ligase，E3）。在3种酶的作用下，泛素（ubiquitin，ub）分子的C端羧基与底物蛋白赖氨酸（Lys）残基的?氨基形成酰胺异构肽。同时，泛素也能发生泛素化修饰形成不同的泛素链，而不同的泛素链又介导不同的生物功能。泛素化修饰不仅参与底物蛋白的26S蛋白酶体降解过程，还参与基因转录、细胞周期、DNA损伤和免疫应激等生物过程。

大规模富集泛素聚合物是研究泛素化系统的关键技术。传统的泛素化蛋白质表征策略通常需要使用表位标签对过表达的泛素进行免疫沉淀，或使用泛素抗体（适用于大规模研究，但成本较高）。另一种方法是使用特定的泛素结合相关结构域（UBA）来分离多泛素化蛋白质，但这些蛋白质对泛素的亲和力较低。此外，这些策略需要包含去泛素化酶和蛋白酶体活性的抑制剂，以保护多泛素化蛋白质的完整性，这些条件可能会改变细胞生理状态，从而可能对结果产生负面影响或引入实验误差。

LifeSensors开发了串联泛素结合结构（TUBEs）来克服这些问题，TUBEs本质上是串联的UBA，其与四聚泛素的解离常数在纳摩尔范围内。实验证明，即使在没有抑制剂的情况下，TUBEs也能保护蛋白质免受去泛素化和蛋白酶体介导的降解的影响。TUBEs对多泛素化蛋白质的纳摩尔亲和力使得从细胞系和组织中高效分离和表征这些蛋白质成为可能。TUBEs的优越性使其能够高效检测多泛素化蛋白质的天然状态，而TUBEs的多功能性则满足了广泛的实验需求。

磁性TUBEs是将TUBE结构域直接耦合到磁珠上，用于通过免疫印迹和/或下游蛋白质组学研究来鉴定和表征多泛素化蛋白质。磁性TUBEs方便地实现了多泛素化蛋白质的“一步式”下拉纯化。

产品优势：

1、可快速有效的实现泛素化蛋白的富集和纯化

2、相较于单个UBA结构域，对多泛素化蛋白质具有高达1000倍的亲和力

3、与泛素抗体相比有更高的特异性和亲和力

4、保护蛋白质不被去泛素化，同时可避免靶蛋白发生蛋白酶体介导的降解

5、避免过度表达带表位标签的泛素进行下拉纯化

6、磁珠使得下拉纯化更加高效，并且背景信号更低

?通用性TUBEs产品推荐

? 特异型TUBEs（M1、K48、K63）

LifeSensors成立于1996年，位于美国宾夕法尼亚州费城，是一家为药物发现与研究提供方法和可行性技术方法的生物技术公司，目前主要的产品有400多种，其产品主要覆盖泛素和泛素蛋白酶体通路等科学应用领域，并且公司拥有两大独家技术平台：用于细胞信号和药物发现的泛素蛋白酶体系统(UPS)，以及增强目的蛋白在大肠杆菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞中表达与纯化的SUMO融合表达系统，此外，LifeSensors还为泛素的蛋白质组学提供众多定制技术服务，并且已经开发了各种各样的测定细胞中的生理底物或生物标志物的方法。

艾美捷作为LifeSensors在中国的区域总代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的LifeSensors的产品。