Biogradetech：肽N-糖苷酶F

发布者：艾美捷科技发布时间：2023-09-14

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蛋白质糖基化(glycosylation)是指将糖链通过共价方式连接到目标蛋白分子上的过程，是在生物界普遍存在的一种蛋白质翻译后修饰。蛋白质糖基化在很多重要的生物学过程中发挥着关键作用，包括细胞黏附、分子转运和清除、受体激活、信号转导等。几乎所有的膜蛋白和分泌蛋白都含有糖基化修饰。常见的两种糖基化修饰为N-连接糖基化修饰和O-连接糖基化修饰，其中N糖糖基化修饰有多种不同类型的糖链，包括复杂糖链（complex，含有以岩藻糖、半乳糖和唾液糖为组分的糖链残基）、高甘露糖链（high-mannose，含有多个α-连接的甘露糖残基）、杂交型糖链（hybrid，兼有高甘露糖型、复杂型特点）。这些糖链可以影响生物分子的结构、功能和相互作用，从而调节细胞信号传导、分子识别、免疫应答等生物过程。

作为N-糖蛋白去糖基化酶，肽N-糖苷酶F（PNGase F，也称N-糖肽酶、N-糖酰胺酶、肽-N-糖苷酶）可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸，生成含有天冬氨酸的多肽链并释放完整的N-糖链。PNGase F广泛用于抗体及相关蛋白去糖基化，是目前应用最多的糖生物学分析工具酶，N-糖蛋白经PNGase F水解，获得的寡糖链可通过质谱、毛细管电泳等技术分析鉴定糖链结构及丰度，已在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病与糖基化研究中得到应用。

PNGase F.png

艾美捷作为Biogradetech的中国区独家代理，为您推荐高品质肽N-糖苷酶F（PNGase F）：

货号	C-BSM3303
名称	PNGase F, His-tag 肽N-糖苷酶 F（His标签）
规格	15000U & 75000U
说明	本产品通过大肠杆菌重组表达，带有His标签，含有50%甘油，常应用于抗体及其相关蛋白去糖基化。
酶活单位定义	1 个酶活力单位 (U) 指在 10 μl 反应体系中，37℃下反应 1 h 从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95% 碳水化合物所需要的酶量。
纯度检测	使用 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%
糖苷酶与蛋白酶活性检测	无可检出的内切糖苷酶 F1、F2 或 F3 活性；无可检出的蛋白酶活性
使用方法	1. 变性条件下去糖基化 ① 将 1~20 μg 糖蛋白，1 μl 10× Denaturing Buffer 和 ddH2O（如有必要）混合至总体积 10 μl；注：10× Denaturing Buffer 在低温储存时可能出现白色沉淀，使用前可先在 37℃下温育使其溶解。 ② 100℃反应 10 min 使糖蛋白变性后，冰上冷却，离心 10 s； ③ 加入 2 μl 10× PNGase F Buffer，2 μl 10% NP-40，补充 ddH2O 使总反应体积为 20 μl； ④ 加入 1~2 μl PNGase F，轻轻混匀，37℃孵育 1~3 h。 2. 非变性条件下去糖基化 ① 将 1~20 μg 糖蛋白，2 μl 10× PNGase F Buffer 和 ddH2O（如有必要）混合至总体积 20 μl； ② 加入 2~5 μl PNGase F, 轻轻混匀； ③ 37℃ 孵育 4~24 h。

Biogradetech全球生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商：Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。

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