PBL Assay Science：VeriKine Human IFN beta ELISA kit

HCMV属于β疱疹病毒亚科，全球血清阳性率高达90%，它能建立潜伏感染并在宿主一生中持续存在。HCMV拥有约230kb的双链DNA基因组，编码数百种蛋白质和非编码RNA。HCMV在感染过程中会与宿主细胞发生广泛的相互作用，操控细胞机器并扰乱正常功能，其中包括改变核环境、招募染色质修饰因子和DNA修复机器。此外，HCMV还能激活基因组中的重复元件，包括内源性逆转录病毒和卫星重复RNA，但对HCMV与这些重复元件的互作机制知之甚少。

L1是自主活动的逆转录转座子，约占人类基因组的17%。L1编码两种蛋白：ORF1p（一种核酸伴侣蛋白）和ORF2p（具有核酸内切酶和逆转录酶域的蛋白）。这两种蛋白优先与其亲本mRNA结合，形成L1核糖核蛋白（RNP）颗粒，进而通过目标启动的反转录（TPRT）机制引发DNA断裂并在基因组中生成新的L1插入。L1转座子对基因组完整性构成威胁，同时也参与宿主基因组的进化。

病毒和转座子作为遗传寄生体，经常利用宿主细胞内的组件来完成自身的复制周期。然而，关于病毒与转座子之间相互作用的具体机制仍知之甚少。

Eunjung Alice Lee 和Kwangseog Ahn 发表了《Human cytomegalovirus harnesses host L1 retrotransposon for efficient replication》，本研究旨在揭示HCMV如何利用L1转座子蛋白在其复制周期中提高复制效率。

研究方法：本研究采用了多种实验方法，包括RNA测序（RNA-seq）、转座酶可及性染色质测序（ATAC-seq）、免疫共沉淀（Co-IP）、蛋白质组学分析、荧光成像、流式细胞术以及高通量测序等，以全面解析HCMV与L1逆转录转座子之间的相互作用。

实验：

HCMV感染激活L1逆转录转座子表达：通过RNA-seq和qPCR实验发现，HCMV感染显著上调了宿主细胞中L1转座子的表达。特别是在感染的不同阶段，L1 RNA和蛋白质水平均显著增加。进一步实验表明，UV灭活的HCMV无法激活L1表达，说明L1的激活依赖于HCMV的活性基因表达。

HCMV上调L1表达的机制：使用ATAC-seq分析了HCMV感染对L1基因组区域染色质可及性的影响，发现感染导致L1区域的染色质变得更为开放。通过转录因子结合基序富集分析，发现HCMV感染上调了L1转录因子YY1和RUNX3的表达，这些转录因子与L1启动子区域的结合增加，促进了L1的转录。

L1表达对HCMV复制的影响：构建了携带针对L1 mRNA的shRNA的HCMV病毒株，发现L1敲低的HCMV病毒株复制效率显著下降，说明L1表达对于HCMV的高效复制至关重要。进一步实验表明，L1敲低并未显著影响宿主细胞的抗病毒免疫反应，排除了通过减弱免疫反应来促进病毒复制的可能性。

HCMV UL44与L1 RNP复合物的相互作用：通过免疫共沉淀结合液相色谱-串联质谱（LC/MS）分析，发现HCMV DNA聚合酶亚基UL44是L1核糖核蛋白（RNP）复合物中最丰富的病毒结合蛋白。进一步实验表明，UL44与L1 ORF2p存在直接相互作用，这种相互作用依赖于RNA。

L1诱导的DNA损伤反应：发现HCMV感染过程中，L1 ORF2p诱导的DNA损伤标志物pH2AX在病毒复制区域显著累积。通过使用L1 ORF2p的核酸内切酶（EN）和逆转录酶（RT）缺陷型突变体，发现EN活性对于诱导DNA损伤反应至关重要。

L1逆转录转座子对HCMV基因组稳定性的影响：使用人类活性转座子测序（HAT-seq）和深度Illumina全基因组测序（WGS）分析HCMV基因组中的L1插入和突变情况，发现内源性L1逆转录转座子并未在HCMV基因组中造成显著的克隆性插入或突变积累。进一步分析表明，L1介导的突变负担并未在L1敲低的HCMV病毒株中显著减少，说明L1逆转录转座子并非HCMV遗传适应的主要机制。

L1逆转录转座子加速HCMV DNA复制：通过EdU掺入实验发现，L1表达促进了HCMV DNA的复制。使用拓扑异构酶I抑制剂喜树碱（CPT）诱导复制叉停滞，发现L1表达显著促进了停滞复制叉的重启。使用加速的新生DNA上蛋白质的原位分离（aniPOND）技术，发现UL44和L1 ORF2p在病毒复制叉上显著富集，说明L1逆转录转座子参与了HCMV DNA复制的调控。

结论

本研究揭示了HCMV通过上调宿主L1逆转录转座子表达，并利用L1的核酸内切酶活性诱导DNA损伤反应，从而促进自身DNA复制的新机制。这一发现不仅增进了我们对HCMV复制策略的理解，也为开发针对HCMV感染的新疗法提供了潜在靶点。

PBL Assay Science品牌的VeriKine Human IFN beta ELISA kit（货号： PBL-41410-1）产品的作用和价值

在本研究中，PBL Assay Science品牌的VeriKine Human IFN beta ELISA kit试剂盒被用于检测HCMV感染过程中宿主细胞分泌的干扰素-beta（IFN-beta）水平。IFN-beta是一种重要的抗病毒细胞因子，对于宿主细胞抵抗病毒感染具有重要作用。通过ELISA试剂盒检测IFN-beta水平，研究团队能够评估HCMV感染对宿主细胞抗病毒反应的影响。

该ELISA试剂盒的作用和价值主要体现在以下几个方面：

高灵敏度与特异性：ELISA试剂盒采用高度特异性的抗体对进行检测，能够准确测量细胞培养上清液中的IFN-beta浓度，为研究提供可靠的实验数据。

操作简便：试剂盒提供了详细的操作指南和标准化的实验流程，研究人员可以方便地按照说明书进行操作，无需复杂的设备和技术，即可获得准确的结果。

重复性好：ELISA试剂盒具有良好的重复性，能够在不同批次实验中保持一致的检测效果，为科学研究提供可靠的保障。

应用广泛：除了本研究中的HCMV感染模型外，该ELISA试剂盒还可用于其他病毒感染、自身免疫性疾病以及癌症等相关研究中IFN-beta水平的检测。

PBL Assay Science品牌的 VeriKine Human IFN beta ELISA kit（货号： PBL-41410-1）试剂盒在本研究中发挥了重要作用，为研究HCMV感染过程中宿主细胞的抗病毒反应提供了可靠的实验手段。同时，该试剂盒的优异性能也使其在生物医学研究中具有广泛的应用前景。

美国的PBL Assay Science（又名：Pestka Biomedical Laboratories, Inc.）成立于1990年，创始人Sidney Pestka被称为“干扰素之父”，PBL Assay Science 作为干扰素和细胞因子蛋白和抗体以及预包装的一流的干扰素和细胞因子免疫测定试剂盒的高质量制造商而享有盛誉。生产和销售的高品质干扰素产品和生物标志物检测试剂盒在很多高影响力出版物中都有引用，并已在具有挑战性的样本中进行了外部验证。

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