Norgen Biotek：外泌体纯化试剂盒

发布者：艾美捷科技发布时间：2022-04-12

分享到：

外泌体是位于体内的细胞外囊泡。特别是在液体活组织检查中，如血浆、脑脊液、唾液、尿液、母乳等。它们的大小通常为40-100nm，是体内最小的囊泡。

外泌体的结构：

外泌体有一个含有表面蛋白的磷脂双分子层。这些蛋白质可以均匀地存在于所有的外泌体中，或者根据外泌体释放的位置而独特存在。这些表面蛋白有如：CD63，CD9，Alix。
外泌体包含蛋白质、RNA和microRNA，偶尔也包含DNA。

外泌体结构图

外泌体的应用：外泌体在体内有特定的应用，但也可用于其他临床目的。它们可用于：

（1）免疫调节；

（2）组织再生；

（3）诊断；

（4）生物标记物发现；

（5）基因治疗。

外泌体纯化：有多种方法可以纯化外泌体。这些方法包括差速离心（differential centrifugation）、密度梯度超速离心（density-gradient ultracentrifugation）、尺寸排阻（size exclusion）、磁激活（magnetics activated）、基于polymer（polymer-based）、免疫学方法（immunological methods）和微流体（microfluidics）。

痛点：

其中一些纯化方法不是特异性的，因为它们共同纯化外泌体和其他细胞外囊泡。这意味着当涉及到外泌体内容物的纯化时，细胞外囊泡的内容物也将被纯化。

例如，如果外泌体沉淀中含有凋亡小体，则凋亡小体中所含的DNA也会随着外泌体的RNA、microRNA和蛋白质内容物一起被纯化。这可能会误导潜在的分析。

这些方法中的大多数都需要花费大量的时间。

例如，基于polymer的方法需要过夜孵育期。

其中的一些方法的低通量限制了样本量，并最终限制了外泌体的多样性或产量。
其中的一些方法需要在外泌体纯化之前进行预处理，以及特殊的仪器。

外泌体RNA提取

Norgen用于外泌体纯化的SiC技术：该纯化技术通过调节样品的pH值来改变外泌体表面蛋白的电荷，使其与碳化硅技术结合。

艾美捷科技作为专业的生命科学领域解决方案供应商，为您推荐独家代理Norgen Biotek品牌的各种外泌体纯化试剂盒。操作快速、灵敏、特异，允许高通量，不需要特殊的仪器或预处理。产品仅限用于科研学术研究用途，不得用于医疗与诊断。

产品名称及描述	货号	上样量范围
Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit	58300	50 ?L - 1 mL
Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit	58500	1 mL - 4 mL
Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit	58600	4 mL - 10 mL
Urine Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit	58400	250 ?L - 1 mL
Urine Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit	58700	2 mL - 10 mL
Urine Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit	58800	11 mL - 30 mL
Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit	60700	5 mL - 10 mL
Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit	60800	10 mL - 20 mL
Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit	60900	20 mL - 35 mL
Saliva Exosome Purification Kit	65300	Up to 2 mL

Norgen试剂盒的方法原理：

（1）将引入 ExoC buffer 来调整样品的pH值，从而改变外泌体表面蛋白质的电荷。

（2）一旦 SiC slurry E 被加入到样品中，改性的表面蛋白将结合到 SiC 上并形成沉淀颗粒。

（3）由于蛋白质结合的 RNA 也会与 SiC 结合，下一步将从SiC和蛋白质结合的RNA中分离外泌体。 ExoR buffer将被引入沉淀颗粒中，并再次修饰外泌体表面蛋白。

（4）外泌体将从 SiC 中释放出来，上清液中将包含纯化的外泌体。

Norgen的SiC技术用于从外泌体中纯化RNA：

（1）一旦外泌体被纯化，外泌体的内容物就可以被用来研究了。

（2）Norgen的RNA纯化试剂盒也使用SiC技术：

①不使用苯酚或氯仿（他们有高度毒性和影响下游分析）；

②灵敏度高，意味着不需要载体RNA（这又会影响下游处理，如测序）；

③没有大小偏差或GC含量偏差（独特的）。

（3）注意：由于RNA的浓度较低，因此使用bioanalyzer（低至50 pg）或Norgen自己的定量试剂盒（低至1 pg）进行RNA定量是很重要的，因为它们的检测限很低。

由于缺乏核糖体RNA，因此RIN值和260:280比值不适用。

额外补充的要点：

（1）在纯化外泌体和RNA方面没有达到预期的产量。产量差异是很大；它取决于细胞的活性、健康状况、年龄等。RNA产量一般在1-100 pg/μL范围内。

（2）Norgen试剂盒可以从新鲜或冷冻样品中纯化外泌体。但是，如果您要使用冷冻样品，不要去除样品中形成的蛋白质沉淀物这点很重要，因为它会含有外泌体。

（3）优秀文章鉴赏：Human myeloma cell- and plasma-derived extracellular vesicles contribute to functional regulation of stromal cells. Proteomics. 2021 (当您对使用Norgen试剂盒纯化的外泌体用于蛋白质组学有疑问时，请参考这篇文章。本文展示了正确的分析方法，并证明从Norgen试剂盒中纯化的外泌体可用于蛋白质印迹、质谱、纳米颗粒和电子显微镜检查。)

该文章DOI: 10.1002/pmic.202000119

Tips：低丰度RNA的定量

（1）无法使用NanoDrop进行定量。需要其它方法。

（2）请参阅Application Note 47 - Revised Guidelines for RNA Quality Assessment for Diverse Biological Sample Input.

看到这儿，您心动了吗？马上联系小艾吧！

上一篇：Rockland：RFP/DsRed红色荧光蛋白抗体

下一篇：Rockland：TrueBlot系列IP产品

相关文章