Nanoprobes：胶体金替代品纳米金标记

一、胶体金标记：

胶体金（colloidal gold），又称金溶胶（gold solution），是指分散相粒子直径在1—150nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系，颜色呈桔红色到紫红色。胶体金可以作为标记物用于免疫组织化学，近10多年来胶体金标记已经发展为一项重要的免疫标记技术。胶体金免疫分析在药物检测、生物医学等许多领域的研究已经得到发展，并越来越受到相关研究领域的重视。

常规胶体金尺寸的选择取决于还原剂：

• ①硫氰酸盐：6nm

• ②乙醇：10nm

• ③白磷：3nm

• ④柠檬酸钠：12-64nm

• ⑤柠檬酸+单宁酸：3-17nm

胶体金结合方式：

• ①通过电荷结合：当带正电荷的基团附着在带负电荷的[AuCl₂]-金表面时，蛋白质与胶体金结合。

• ②通过疏水相互作用结合：胶体金具有疏水性质，可以结合疏水域，例如抗体Fc区域的疏水域。

• ③通过巯基配位结合：巯基（-SH）对金有很强的亲和力。蛋白质可以通过半胱氨酸残基结合，核酸可以通过合成巯基修饰结合。

胶体金标记的局限性：

• ①标记物的种类有限：能带上胶体金标记的物质仅限于抗体、蛋白质（链霉亲和素、Protein A、Protein G）、部分肽以及巯基修饰的寡核苷酸结合物。

• ②容易跟共轭物解离：结合蛋白可以解离并与标记蛋白竞争以实现目标结合，减少标记。

• ③容易发生聚集：胶体金结合物会聚集在一起。

• ④容易产生背景：暴露的金表面可以与细胞和组织发生非特异性结合。

• ⑤探针体积大：胶体金需要额外的大分子（如BSA）来稳定，探针更大会阻碍标记物在样本中的渗透

• ⑥共轭位点非特异性：难以控制结合的几何形状和化学计量。

二、纳米金（Nanogold?）标记

Nanogold^④是一种与众不同的金标记。与常规胶体金相比，它在显微镜上的性能得到了改善，对其连接方式和位置明确可控使其成为纳米生物技术和纳米结构材料等众多新领域中的理想选择。

1.4 nm Nanogold^? 颗粒是一种离散的金化合物。因为它是一种单一的化合物，所以大小非常均匀，而最常用的“1nm”胶体金实际上在1到3nm之间，其化学和光谱性质高度一致。

胶体金（A）和Nanogold尺寸比较：Nanogold尺寸较胶体金小很多，不会影响抗原/抗体表位	Nanogold（A）和胶体金标记结果比较：Nanogold显示出良好分辨率及对比度

与传统的胶体金不同，它不吸附在蛋白质上，而是在温和的缓冲条件下，在结构内精准定位与特定的化学基团共价结合。Nanogold^?可通过多种不同的反应进行共轭，并可用于标记具有适当反应基团的任何分子。Nanogold?已被用于标记寡核苷酸、脂质、肽、蛋白质、酶抑制剂、底物类似物和其他小分子。

Nanogold^?共轭物是一种定义明确的分子，在各种缓冲液和pH条件下都是稳定的，可以通过色谱纯化。

Nanogold^?是一系列具有不同化学反应性的标记试剂。你可以使用这些独特的产品来标记你自己的生物分子、大分子、纳米结构材料或表面。Nanogold^?-抗体IgG、Fab'和蛋白质结合物也可提供。

虽然1.4 nm Nanogold^?是最小的电镜（EM）探针之一，但仅需短暂使用的银/金增强试剂（LI-silver，HQ-silve或金增强）以产生2-30 nm（取决于显影时间）或更大尺寸的高可见颗粒。长时间孵育产生在光学显微镜中容易看到的密集、视觉清晰的黑色信号。这也为SDS-PAGE、免疫印迹和Western blots提供了高度敏感和特异的检测和可视化选择。

Nanogold?卓越性能：

• ①尺寸小，渗透性能好：不需要额外的大分子，分辨率更高，能渗透进入40?m的组织。

• ②选择性广：能用合适的反应基团标记任何分子。

• ③颗粒均匀：极其均匀的1.4nm金颗粒，无交联和聚集现象。

• ④位点特异性：特定位点标记，不影响共轭物的生物活性。

• ⑥高稳定性：共轭物在各pH值和离子强度下均表现稳定，有较长的保质期。

• ⑦低背景：最小的非特异性结合。 

三、我们能提供的Nanogold?种类：

①纳米金结合物：共价结合了Fab’/IgG/链酶亲和素/荧光/脂质/不同反应基团的纳米金，是市面上最小的免疫金标探针，各方面性能均优于胶体金。

应用类型及实例：

• 1）原位杂交（ISH）

• 2）电子显微镜

• 3）光学显微镜和共聚焦显微镜

• 4）免疫层析/侧向流动

• 5）免疫印迹和IHC

• 6）凝胶染色Nanogold标记条带

ISH（原位杂交）检测：SiHa细胞中HPV 16的单拷贝	电镜检测：单马来酰亚胺标记的Nanogold(箭头)特异性结合在IgG分子上铰链的硫醇位点。
光学显微镜检测：纺锤体Tubulin标记，左：胶体金标记；右：Nanogold（纳米金）	免疫印迹检测：Nanogold?-抗小鼠Fab'检测小鼠IgG，实现了前所未有的灵敏度（0.1pg灵敏度）
侧向流动/免疫层析：开发快速检测试纸条

Nanogold?优点：

• ①金颗粒与Fab’或IgG比例接近1

• ②粒径小（4nm），且均匀

• ③低背景

• ⑥灵敏度高

• ⑦稳定

产品推荐：

标记上纳米金（Nanogold?）的二抗及链霉亲和素：

同时标记上纳米金（Nanogold）和荧光的二抗：

标记上纳米金（Nanogold）的脂类：

带不同反应基团的纳米金（Nanogold）颗粒：

② 3-5nm/2-4nm/0.8nm/1.4nm， 带正电/负电/不带电荷，亲水/疏水的纳米金颗粒：用带化学基团的不同配基包被和稳定，溶解性不同

应用：在多种系统和环境中的应用广泛

产品推荐：

③ Undecagold (Au11)：比纳米金（Nanogold）小，直径仅0.8nm。适用于*高分辨率电镜（如扫描透射电镜）或透射电镜与图像处理结合的技术。单个聚合物在TEM下通常不能被直接观测到，染色更慢，与纳米金相比，银沉积的量更少。因此在很多应用中，建议选用纳米金而非Undecagold。

产品推荐：

Nanoprobes公司成立于1990年，专门生产免疫金标记和免疫测定试验产品。主要为广大科研机构提供用于检测生物分子的最灵敏的试剂和技术。Nanoprobes公司独特的金标技术使用化学交联的金属簇和纳米颗粒作为标签。与胶体金颗粒静电吸附在抗体和蛋白质上的传统免疫金探针不同，Nanoprobes公司的金标是与生物分子在特定位点交联的不带电荷的分子，故其探针具有胶体金不具备的范围和灵活性。Nanoprobes标签可以附着在任何带有反应基团的分子上，比如蛋白质、多肽、寡核苷酸、小分子和脂类等，以检测和定位这些分子。其金标也可以和其他标签结合，一起使用。Nanoprobes独特的荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold?）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。

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