彗星实验(Comet assay)也被称为单细胞凝胶电泳实验(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是一种超灵敏的单细胞水平上检测DNA损伤的技术, 是由Ostling等研究者于1984年首次提出的一种通过检测DNA链损伤来判别遗传毒性的技术。可以检测到细胞中的DNA断裂,甚至检出例如自然光照射体外淋巴细胞1h后引起的DNA损伤。
当各种内源性和外源性 DNA 损伤因子诱发细胞 DNA 链断裂时,其超螺旋结构受到破坏,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜等膜结构受到破坏,细胞内的蛋白质、RNA 以及其他成分均扩散到电解液中,而核DNA由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。电泳过程中,如果DNA没有损伤,则将停留在原位,染色后呈圆形的荧光团,无拖尾出现。如果DNA受损,断裂的碎片进入到凝胶中,在电场的作用下,DNA碎片离开原位向阳极迁移,形成拖尾。
实验步骤
该彗星实验法检测低浓度遗传毒物具有高灵敏性,研究的细胞不需处于有丝分裂期。同时,这种技术只需要少量细胞。
·制备单细胞悬浮液,在 37℃ 条件下,悬浮液与低熔点琼脂糖(LM琼脂糖)混合;
·将琼脂糖、细胞混合物涂布在预处理的载玻片上;
·4℃条件下用裂解液处理30-60min或过夜,裂解液由去垢剂及高盐溶液组成,可去除多余的细胞膜及组蛋白;
·将载玻片浸入电泳溶液中;
·进行凝胶电泳,随后,中和载玻片,待LM琼脂糖完全干燥后,用荧光染料染色,并于荧光显微镜下观察DNA损伤程度。
产品优势
试剂整齐安全可靠:提供特色涂层多孔彗星玻片,增加凝胶与载玻片粘附力,有效降低脱胶风险。
优点:操作简便:无需用不同熔点琼脂糖繁琐铺胶,可快速、灵敏的检测细胞 DNA 损伤。
实验效果展示
Biogradetech 彗星试剂盒检测Jurkat细胞的DNA 损伤,并和A品牌进行比较。彗星试剂盒检测不仅步骤更简便,省时高效,且荧光较亮,样本不易脱落,可形成稳定鲜亮的结果。
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