艾美捷科技作为Jackson中国区域总代理,将为您提供Jackson的特色优质产品主要包括各种纯化的二抗、标记的二抗(AMCA、 Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、长臂生物素、辣根酶和碱磷酶标记)、胶体金试剂等。今天主要为您介绍封闭血清,看下文介绍:
想必各位实验达人对于免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)应该都比较熟悉了,在做免疫组化(IHC)或是免疫荧光(IF)实验过程中,高背景是我们经常遇见的问题,有的时候尽管我们进行了封闭操作,背景依旧居高不下。想当年我也曾经就被免疫荧光背景问题带来的恐惧深深支配过,别人做的免疫荧光的结果是这样的:
我按照同样的步骤做的免疫荧光,只是没有染色DAPI,结果是这样的:
我的细胞你在哪?(是不是上帝在我眼前遮住了脸,忘了掀开)
直到某天我在艾美捷官网上浏览到关于IF实验产生背景的原因及降低背景的常用方法:
IF降低背景:
高背景是免疫荧光常见的问题,解决此问题可以用二抗来源的正常血清代替 BSA 做封闭液,降低抗体浓度,增加洗涤次数,洗涤至少三次,每次五分钟,推荐洗涤液为 PBS+0.05% Tween。
我们实验室之前大多数都是使用BSA进行封闭,用正常血清代替BSA进行封闭倒是第一次听说,血清真的有如此奇效,我迫不及待的赶紧去尝试了一番,荧光背景确实显著降低了。
血清作为封闭剂的原理:
强烈建议在PBS中稀释至5%(v / v)的正常血清作为封闭剂,以减少免疫反应中非特异性,保守序列和/或Fc受体结合的背景。用稀释的正常血清与标记抗体来自同一宿主,可获得最佳结果,作为添加一级抗体之前的单独孵育步骤。
用血清进行封闭效果好吗?
封闭血清适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭,可以封闭待检样本中与蛋白质非特异性结合的位点,另外还可以封闭样品中内源性的Fc片段结合位点,阻断抗体与样品中的Fc受体结合,从而降低背景,减少假阳性。对于适用多抗的实验,选择二抗种属来源的正常血清是封闭处理的金标准。
封闭血清如何使用?
推荐用PBS将封闭血清原液稀释5-20倍,配成5%-20%的工作液,直接滴加在组织切片或者细胞涂片上,37℃度孵育10-30min(或者室温1h),清除血清,不用洗涤,滴加适当比例稀释的一抗工作液,37℃孵育1-2h或4℃过夜。
通过上面对封闭血清的介绍,您是不是有一种想立刻动手试一试的冲动呢? 心动不如行动,快来动手试一试吧,看看小艾给您介绍的降低背景小技巧对您的实验有没有帮助,相信您也可以做出漂亮的图片!
封闭血清推荐:
产品名称 | 货号 | 规格 |
Normal Donkey Serum(驴) | 017-000-121 | 10 ml |
Normal Alpaca Serum(羊驼) | 028-000-121 | 10 ml |
Normal Bovine Serum(牛) | 001-000-121 | 10 ml |
Normal Cat Serum(猫) | 002-000-120 | 5 ml |
Normal Chicken Serum(鸡) | 003-000-120 | 5 ml |
Normal Dog Serum(狗) | 004-000-120 | 5 ml |
Normal Goat Serum(山羊) | 005-000-121 | 10 ml |
Normal Syrian Hamster Serum (叙利亚仓鼠) | 007-000-120 | 5 ml |
Normal Horse Serum(马) | 008-000-121 | 10 ml |
Normal Human Serum(人) | 009-000-121 | 10 ml |
Normal Mouse Serum(小鼠) | 015-000-120 | 5 ml |
Normal Rabbit Serum(兔) | 011-000-120 | 5 ml |
Normal Rat Serum(大鼠) | 012-000-120 | 5 ml |
Normal Sheep Serum(绵羊) | 013-000-121 | 10 ml |
Normal Swine Serum(猪) | 014-000-121 | 10 ml |
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