PBL Assay Science：VeriKine-HS人IL-15 ELISA试剂盒

作者： Alok Pandey，博士，PBL Assay Science公司生物标志物与转化科学副总裁

在使用ELISA试剂盒检测蛋白质生物标志物时，PBL Assay Science公司反复观察到的一个现象是，并非所有检测都是同等有效的。基于我们在ELISA设计、制造以及为客户验证和运行第三方ELISA方面的30多年经验，我们发现了在检测设计、性能和特性化方面存在的一些常见关注点，包括：

设计未充分考虑目标分析物的生物变异性：例如，某些分析物以不同的异构体形式存在或作为分子复合物的一部分，而许多检测并未优化以检测这些形式。

定量灵敏度不足：理想的ELISA应能准确量化健康供体样本中低浓度的分析物，以提供与疾病状态样本进行比较的基线。

在存在常见干扰物时的定量不准确：健康和疾病状态样本中的生物化合物可能会人为地降低信号，如果检测未针对这些干扰物进行优化。

检测规格不完整：ELISA规格应详细说明检测范围和定量下限（LLOQ），即分析物能被可靠量化的最低浓度。根据当前的ICH M10生物分析验证指南，LLOQ必须大于或等于校准曲线中的最低点。一些制造商未能以展示可靠和一致性能的方式验证其检测，且许多制造商未指定LLOQ，导致数据解释的不一致性。

PBL在ELISA产品设计中解决的四个挑战示例：

VeriKine-HS人IL-15 ELISA试剂盒（产品货号#41702）

大多数ELISA仅测量游离的IL-15或大肠杆菌表达的IL-15，而PBL设计的IL-15试剂盒能够检测游离的IL-15和IL-15/IL-15Rα复合物——这是人血液中的主要形式。该试剂盒旨在检测健康供体血清和血浆中的基础内源性总IL-15和IL-15/IL-15Rα复合物。在测试的健康供体血清样本中，100%的样本显示IL-15的量高于定量下限。

图1：IL-15/ IL15Ra配合物标准品的检测。IL15/IL15Ra标准检测不良（竞争者B）或根本未检测到（竞争者A和C）。

VeriKine-HS人IFN-Alpha全亚型ELISA试剂盒（产品货号#41115和#41135）

尽管许多研究人员认识到存在12种人类IFN-alpha蛋白亚型，但市场上的大多数检测并未在健康供体和疾病患者中检测到全部亚型，导致定量不准确。PBL的试剂盒旨在检测所有人类IFN-alpha亚型，并已通过各种疾病状态血清样本测试，以尽量减少假阳性和假阴性结果。该产品的高灵敏度（比其他ELISA高10倍）特别适用于区分人类样本中常见的较低水平的干扰素。

图2：仙台病毒时间过程中内源性干扰素α水平的定量测定

VeriKine-HS人IL-22 ELISA试剂盒（产品货号#41701）

由于IL-22结合蛋白（IL-22BP）的干扰，许多ELISA难以准确测量生物样本中的游离IL-22，且许多检测无法测量健康供体和疾病状态样本中通常存在的低浓度IL-22。PBL设计的ELISA能够有效地在低浓度下量化游离IL-22，确保在健康供体和疾病状态样本中的准确测量。

*竞争对手A列出的ELISA“灵敏度”为5.8 pg/mL，我们将其解释为检测下限（LLOD）。没有提供检测上限（LLOQ）。

表1：PBL与竞品ELISA试剂盒的比较

VeriKine-HS人IFN-Beta ELISA试剂盒（产品货号#41415和#41435）

大多数ELISA无法测量健康供体和疾病患者中低水平的IFN-beta。此外，如果检测不测量与sIFNAR2（一种常存在于现实世界样本中的受体组分）结合的IFN-beta，则ELISA结果可能会人为降低。PBL设计的ELISA能够准确量化pg/ml水平的内源性干扰素，并能在sIFNAR2存在的情况下进行定量。该检测还量化了在大肠杆菌和CHO细胞中表达的治疗性IFN-beta分子，并已通过CRO验证，可用于自身免疫病血清和商标IFN-beta治疗药物的定量。

图3：PBL的检测结果与血清样品一致，不受sIFNAR2存在的影响。

原文链接如下：https://signals.cytokinesociety.org/2024/09/30/elisa-kits-and-real-world-challenges/