Biogradetech：HEK293悬浮细胞培养基

HEK293细胞是一种经常在生物医学研究中使用的人类胚肾细胞系。HEK293细胞系最初是从一个健康的人胚胎肾脏中获得的，经过转染而得到的细胞系。这些细胞具有较高的增殖能力和易于转染的特性，因此在许多生物学研究和生物技术应用中广泛使用。

HEK293细胞可以在培养基中持续增殖，并且对于许多实验室常用的分子生物学和细胞生物学技术非常适用。它们可用于表达外源蛋白质、制备重组蛋白、病毒研究、药物筛选、基因敲除和基因编辑等应用。由于其易于操作和较高的产量，HEK293细胞已成为生物医学研究中常用的工具细胞系之一。

HEK293细胞在生物学研究中具有重要的生物学意义。以下是几个方面的生物学意义：

1. 蛋白表达和生产：HEK293细胞是一种常用的蛋白表达系统。它们可以被用作生产大量外源蛋白质的工具细胞。通过转染目标基因，HEK293细胞可以表达和产生大量的蛋白质，包括重组蛋白、抗体、酶等。这对于生物医学研究、药物开发和生物技术应用具有重要意义。

2. 病毒研究：HEK293细胞对于病毒研究也非常有用。许多病毒需要宿主细胞来进行复制和扩增，而HEK293细胞可以提供一个适合病毒复制的环境。因此，研究人员可以使用HEK293细胞来研究病毒的感染机制、复制策略以及病毒与宿主细胞的相互作用。

3. 细胞信号传导和功能研究：HEK293细胞广泛用于研究细胞信号传导通路和分子机制。通过转染特定基因或表达特定蛋白质，研究人员可以模拟和研究不同的信号传导通路，以进一步了解细胞的功能和调控机制。

4. 药物筛选和毒性评估：HEK293细胞可用于药物筛选和毒性评估。通过将HEK293细胞用于体外药物筛选，研究人员可以评估候选药物的疗效和安全性。此外，HEK293细胞也可以用于评估化合物的毒性和细胞毒性。

总体而言，HEK293细胞在生物医学研究和生物技术应用中具有广泛的应用前景，对于理解细胞生物学、疾病机制和药物开发具有重要的生物学意义。

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HEK293悬浮细胞培养基不含无动物源组分、无水解物、化学成分限定，可稳定高效表达高质量抗体 / 蛋白 / 重组亚单位疫苗。包含3种培养基，分别是HEK293 ExpEnhance SF Medium、HEK293 TransferHelper SF Medium、HEK293 Enhance Feed Medium，每种都可单独订购使用。

HEK293 ExpEnhance SF Medium是一款HEK293细胞通用型全悬浮生长培养基，广泛应用于HEK293悬浮细胞培养，可高效维持HEK293细胞悬浮生长。

HEK293 TransferHelper SF Medium是一款转染用培养基，应用于质粒、siRNA等转染。

HEK293 Enhance Feed Medium是一款HEK293细胞通用型补料培养基，可延长细胞培养时间和细胞密度。

培养基使用方法

HEK293悬浮细胞培养

1. 细胞培养需要在CO₂环境下震荡培养，可选择CO₂培养箱搭配小摇床或自带CO₂控制系统的摇床。培养条件：温度曲线：37℃±0.5℃、湿度曲线：70%±20%、5% CO₂浓度、120-140rpm。

2. 培养过程中需注意以下三点：

1）保证摇床正常运转；

2）防止外界环境温度过高，导致培养箱内温度失控；

3）防止培养箱内水盘缺水，导致培养箱内湿度过低。

HEK293 ExpEnhance SF Medium培养基（A-EXO002）适应

1. 直接适应：最初培养阶段，细胞按初始密度 0.7×10⁶ cells/mL 接种，直接将培养基更换为A-EXO002进行细胞培养。待细胞培养2-3代，且细胞生长稳定后进行后续实验。293细胞稳定生长时，按0.7×10⁶ cells/mL密度接种，培养72h，密度≥4×10⁶ cells/mL，细胞活率≥95%。

2. 间接适应：保持初始接种密度为0.7×10⁶ cells/mL。细胞培养过程中逐步减少原培养基直至完全在A-EXO002培养基中培养。原培养基与A-EXO002比例推荐为（75:25、50:50、25:75、10:90、最终为100% A-EXO002培养基），每个阶段至少适应3代，细胞生长稳定后进行后续实验。293细胞稳定生长时，按照0.5-1×10⁶ cells/mL密度接种，培养72h，密度≥4×10⁶ cells/mL，细胞活率活率≥95%。

3. 注意事项

1） 根据细胞具体情况选择培养基直接适应或者间接适应。

2） 细胞驯化初期，若出现密度低、结团等不稳定状态，根据密度选择合适的传代方式：

a. 稀释传代：根据细胞密度计算传代时所需细胞悬液，去除多余细胞悬液并补加新鲜培养基。

b. 离心传代：根据细胞密度计算传代时所需细胞悬液，800rpm（114g）离心5min，去除上清，用新鲜培养基重悬细胞。

4. 细胞正常状态传代：

不同计数方式可能存在差异，建议使用Countstar细胞计数仪。

HEK293悬浮细胞冻存

1. 待细胞恢复至正常状态后，扩大细胞培养体积准备冻存建库。尽量多建细胞库，保证备份充足。

2. 选择处于对数生长期、活率＞90%的细胞冻存，冻存密度:10-15×10⁶ cells/mL，推荐15×10⁶ cells/mL。

3. 准备冻存盒：向程序降温盒注入适量异丙醇，置于4℃冰箱预冷。

4. 配制细胞冻存液：冻存液 = 80% A-EXO002培养基 + 10% FBS（建议使用进口胎牛血清） + 10% DMSO，冻存液配好后置于4℃冰箱预冷（冻存液配制时，先加培养基再加血清或DMSO，防止DMSO浓度过高导致血清有效成分变性）。

若选择无血清冻存方案，推荐的冻存液配方：92.5% A-EXO002培养基 + 7.5% DMSO。

5. 取细胞悬液，800rpm（114g）离心5min，弃上清，用细胞冻存液重悬细胞，调整细胞密度至目标值。

6. 快速分装细胞液至冻存管中。

7. 将冻存管放入程序降温盒中，放于-80℃冰箱，24h后转至液氮罐中储存。一段时间后复苏检测。

HEK293悬浮细胞复苏

1. 预热培养基：取20mL对应培养基置于摇瓶中，放入37℃二氧化碳培养箱中预热30min以上（平衡培养基pH值），保证预热充分。

2. 将冻存管从液氮保存罐或-80℃冰箱中取出，迅速转移至37℃水浴中，快速摇晃，直至完全融化。

3. 取预热的培养基5mL于无菌离心管中，并将解冻后的细胞悬液移入此离心管中。800rpm（114g）离心5min（除去冻存液中DMSO）。

4. 弃上清，用15mL预热的培养基重悬细胞，移回相应摇瓶，放于培养箱中悬浮培养。

建议瞬转工艺

（以4×10⁶cells/mL，20mL培养基为例）

1.1 转染当日，测量细胞密度，当细胞密度应≥4×10⁶cells/mL，细胞活率≥90%，可进行转染操作。

1.2 质粒转染混合物制备：DNA、PEI和A-EXO003培养基恢复室温。准备1.5mL （7.5%的总体积） A-EXO003培养基稀释质粒DNA（三质粒总量40-60μg，表达质粒、包装质粒、辅助质粒推荐比例为1:4:3）和PEI （90-120μg），先加质粒，轻轻混匀，再加PEI （使用前轻轻涡旋混匀），PEI加入后立即轻轻混匀。

1.3 在室温下静置孵育15min。

1.4 转染细胞：用移液枪轻轻上下吹吸混合液3次后，直接向摇瓶中加入DNA-PEI复合物并轻轻晃动。

1.5 在适当的温度、转速和CO₂水平下培养细胞（如37℃, 120转/分，5%），瞬转24h、48h后分别补加1mL A-EXO001补料培养基（5%的总体积）。

1.6 按实际情况收获病毒（建议72h、96h、120h、144h、168h分别取样检测细胞密度、活率和产量后，选择合适的收料时间）。

2. （以4×10⁶cells/mL，20mL培养基为例）

2.1 转染当日，测量细胞密度，当细胞密度应≥4×10⁶cells/mL，细胞活率≥90%，可进行转染操作。

2.2 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和A-EXO003培养基在进行以下步骤前需先使其升至室温。准备1.5mL （7.5%的总体积） A-EXO003培养基稀释40μg DNA（按照1μg/10⁶ cells）和 80μL PEI 试剂（每 1μg DNA 需用 2μL 线性PEI转染试剂）。先加质粒，轻轻混匀，再加PEI转染试剂（使用前轻轻涡旋混匀），涡旋振荡5s。

2.3 在室温下静置15min。

2.4 转染细胞：用移液枪轻轻上下吹吸混合液3次后，直接向摇瓶中加入DNA-PEI复合物并轻轻晃动。

2.5 将转染细胞放入摇床，培养24h及48h后，分别加入1mL A-EXO001补料培养基（5%的总体积）。

2.6 若转染荧光质粒，转染24h即可观察荧光；若转染蛋白质粒，则按实际情况收获蛋白（建议72h、120h、144h、168h分别取样检测细胞密度、活率和产量后，选择合适的收料时间）。

HEK293培养基从4℃冰箱取出必须恢复到室温后使用。

每次摇瓶取出进行转染或计数等操作后，应尽快放回摇床，切勿长时间室温放置。

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Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。其产品均在严格的全球标准下生产，Biogradetech还提供专业的技术支持，帮助客户选择正确的产品，并正确使用产品。Biogradetech致力于为客户提供高质量的产品和服务，是那些寻求高质量试剂和可靠结果的人值得信赖的合作伙伴。   

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