细胞外囊泡(EV)是从细胞分泌的膜结合的小颗粒,被认为是细胞使者,将货物从一个细胞携带到另一个细胞。细胞外囊泡的几种亚型的功能,货物和尺寸都不同,直径约为30-1000 nm。EV的最小类型是外泌体,大小约为30-150 nm。细胞外囊泡源于一个称为多泡小体(MVB)的细胞室内,该室本身源自内含体的内陷。当MVB与质膜融合并释放运输物时,囊泡就会释放。
在生物医学研究中,EV及其运输物被用作癌症和其他疾病的诊断生物标志物。可以使用超速离心,PEG沉淀和免疫捕获珠等技术从血液或其他生物流体中分离出囊泡。
EV膜携带跨膜蛋白来自起源细胞的质膜,该蛋白通常包括四叠蛋白酶家族的蛋白质(例如CD9,CD63和CD81)。在内部,EV包含细胞质成分,例如蛋白质和RNA。可以使用RNASEQ,Western印迹和流式细胞仪等方法分析EV组分。为了通过流式细胞仪进行表征,研究人员可以使用染色的染料,这些染料像膜和核酸这样的染料,以及与四叠腺苷或其他感兴趣的蛋白质结合的抗体。
Biotium开发的ExoBrite? Annexin EV染料旨在克服外泌体检测的一些挑战,特别是在流式细胞术中。ExoBrite? Annexin EV染色剂是Annexin V的独特配方缀合物,Annexin是一种35-36kDA的钙依赖性磷脂结合蛋白,对磷脂酰丝氨酸(PS)具有高亲和力。由于大多数EV膜上存在PS,Annexin V偶联物已被用于检测EV。
ExoBrite? Annexin EV染色是为了克服EV检测的一些挑战,特别是在流式细胞术中。例如,通常用于染色EV的亲脂性膜染料可以形成与外泌体或EV大小相似的聚集体,从而混淆分析。相反,ExoBrite? Annexin EV染色剂是专门配制的,可最大限度地减少流式细胞术中的聚集,使EV能够在最小背景下通过明亮的染色进行鉴定。此外,ExoBrite? Annexin EV染色剂旨在提供从不同来源分离的EV的广泛覆盖范围。我们测试了来自9个细胞系和ExoBrite? Annexin EV染色显示对所有细胞都有强染色。
EV通常通过使用靶向一种或多种四跨膜蛋白CD9、CD63和CD81的荧光抗体来检测。ExoBrite? EV膜染色剂可与抗体染色结合使用,用于多参数分析。Biotium还提供经验证的可用于外泌体染色的CD9和CD81单克隆抗体,可提供纯化或与大量明亮和可溶性 CF? 染料偶联的抗体。
检测结果赏析:
SEC纯化的HeLa衍生EVs用ExoBrite染色? Annexin EV染色。太平洋蓝通道检测到410/450,FITC通道检测到490/515,PE通道检测到560/585,APC通道检测到655/670。 | ExoBrite? 490/515 Annexin EV染色用于染色SEC纯化的、Jurkat衍生的EV或人工脂质体。EVs染色牢固,但脂质体未染色。本实验中的脂质体由Presome?ACD-1制备,并使用亲脂性染料di-8-ANNEPS验证其大小和浓度与EV相似(数据未显示)。在CytoFLEX流式细胞仪上进行分析,其中从405nm激光检测到SSC,并且ExoBrite?在FITC通道中检测到。Presome?是日本NIPPON FINE CHEMICAL。 |
ExoBrite染色的SEC纯化的HeLa衍生EV? 410/450 Annexin EV染色(左)与缓冲液中的相同染色(右)的比较。在Pacific Blue通道中的CytoFLEX LX流式细胞仪上检测到EV。 | 用ExoBrite染色的SEC纯化的HeLa衍生EV? 490/515 Annexin EV染色(左)与缓冲液中的相同染色(右)的比较。在FITC通道中的CytoFLEX-LX流式细胞仪上检测EV。 |
用ExoBrite染色的SEC纯化的HeLa衍生EV? 560/585 Annexin EV染色(左)与缓冲液中的相同染色(右)的比较。在PE通道中的CytoFLEX LX流式细胞仪上检测EV。 | 用ExoBrite染色的SEC纯化的HeLa衍生EV? 655/670 Annexin EV染色(左)与缓冲液中的相同染色(右)的比较。在APC通道中的CytoFLEX LX流式细胞仪上检测EV。 |
SEC纯化的HeLa衍生EVs首先用ExoBrite染色? 560/585 CD9在100 uL中,然后是1X ExoBrite? 655/670 Annexin EV染色。在PE和APC通道中的CytoFLEX-LX流式细胞仪上检测EV。当我们关闭ExoBrite? 655/670个WGA阳性颗粒中,约50%的颗粒对CD9也呈阳性。 | SEC纯化的HeLa衍生EVs首先用ExoBrite染色? 560/585 CD63在100 uL中,然后是1X ExoBrite? 655/670 Annexin EV染色。在PE和APC通道中的CytoFLEX-LX流式细胞仪上检测EV。当我们关闭ExoBrite? 655/670个WGA阳性颗粒中,约16%的颗粒对CD63也呈阳性。 |
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Biotium公司是一家在荧光技术领域独树一帜的生物技术公司,公司位于美国加利福尼亚的BAY AREA------世界上首要的生物科技中心。该公司一直致力于开发和生产用于生物医学研究的荧光指示剂及其他特殊生化产品。其产品被广泛应用于细胞生 物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液流动检测及大规模药物筛选等众多领域。Biotium公司专利产品众多,包括已经被广泛使用的实时PCR定量荧光染料EvaGreen、具有划时代意义的凝胶核酸染料Gel Red和GelGreen,以及最新推出的Cheetah Taq热启动酶和CF系列蛋白质标记染料等。
目前,Biotium已将其许多专利技术授权给一些主要的国际生物技术公司,包括安捷伦、BD生物科学、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。 宝天生物科技(BTProbes)由美国知名荧光试剂企业Biotium公司于2007年在华成立,是一家专注于生物荧光试剂研发的高科技企业,是多家欧美企业长期供货商,产品被广泛应用于生命科学各个领域。目前宝天可提供超过100款热卖的荧光蛋白(PE, APC),其他荧光原料(FITC),用于PCR荧光原料(5-FAM,6-TAMRA)等。
作为Biotium在中国的区域总代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的Biotium的产品。
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